24小时热门版块排行榜    

查看: 1890  |  回复: 8

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

[求助] PCR产物胶回收试剂盒 已有1人参与

最近在克隆片段,5K左右,PCR上样20微,条带挺亮的了
回收后,加A,用于下一步和T载体连接,
加A之后跑了下电泳,上样量5微,结果效果就成这么暗了,用的是上海捷瑞的胶回收试剂盒,
搞了11个片段,第三遍了~,前两次都回收不到,试剂盒换的是新的一套,结果还是这么惨,
求各位大神帮分析下,或者提供下自己用的比较好的试剂盒(最小片段2.6K,3个3.5K,剩余基本都是5K左右)


PCR产物胶回收试剂盒
PCR产物.jpg


PCR产物胶回收试剂盒-1
加A后回收.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-17 10:25:58
dllchina: 金币+2, 有帮助, 谢谢 2014-03-17 19:26:03
的确很低,浓度你再测一下,看看连载体是否达到要求。我们实验室用的试剂盒是天根产的效果还可以。
hehe
2楼2014-03-17 07:53:58
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

最近在克隆片段,5K左右,PCR上样20微,条带挺亮的了
回收后,可以估量。
加A之后不用回收,直接估量就行,然后连接。
加A用Taq酶是72度反应30min,你看看温度你设置的对不对?
3楼2014-03-17 17:01:40
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-17 17:01:40
最近在克隆片段,5K左右,PCR上样20微,条带挺亮的了
回收后,可以估量。
加A之后不用回收,直接估量就行,然后连接。
加A用Taq酶是72度反应30min,你看看温度你设置的对不对?

是这个温度,酶还是用的新的
4楼2014-03-17 19:25:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dllchina at 2014-03-17 19:25:20
是这个温度,酶还是用的新的...

那你回收之后带亮不亮?   加A之后可以不回收,直接做转化。
5楼2014-03-17 20:12:31
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

引用回帖:
5楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-17 20:12:31
那你回收之后带亮不亮?   加A之后可以不回收,直接做转化。...

回收之后不亮,就是图2那种暗暗的,所以想着换试剂盒
6楼2014-03-17 20:15:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dllchina at 2014-03-17 20:15:03
回收之后不亮,就是图2那种暗暗的,所以想着换试剂盒...

你回收的时候,胶要多溶一会,过柱子过3-4次,这样可以稍多一些。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2014-03-17 20:16:29
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-17 20:16:29
你回收的时候,胶要多溶一会,过柱子过3-4次,这样可以稍多一些。...

恩,下次应助回帖吧,我好给你金币,准备换个厂家的试剂盒,捷瑞的有点挫~
8楼2014-03-17 23:13:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by dllchina at 2014-03-17 23:13:00
恩,下次应助回帖吧,我好给你金币,准备换个厂家的试剂盒,捷瑞的有点挫~...

好的。能对你有帮助就行。
9楼2014-03-18 10:39:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dllchina 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见