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xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 用带预染的Mix做大肠杆菌菌液PCR后,大部分EP管中颜色消失!

我将胶回收的DNA片段转入大肠杆菌DH5ɑ后,吸取1微升菌液做PCR检测。
开始采用的是康为的带预染的Mix(蓝色),扩增完成之后发现20管中有15-16管都变成无色透明,而且检测没有目的条带。
后来采用TaKaRa带预染的Mix(绿色),仍然出现类似的现象。
按理说即使没有目的条带,也应该是带原来颜色的,但是竟然变成无色透明的了,小弟实在困惑,难道是大肠杆菌产生了什么次级代谢产物,将染料分解了??
请各位大侠指点一二!
小弟在此谢过!

[ 来自科研家族 智慧微生物 ]
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何之舟

新虫 (初入文坛)

支持楼主!
2楼2012-05-27 10:15:09
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xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 何之舟 at 2012-05-27 10:15:09
支持楼主!

谢谢支持,呵呵
3楼2012-05-27 10:37:31
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dmzha

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也是用的康为的带预染的Mix(蓝色),做大肠杆菌菌液PCR没出现过楼主的情况。
4楼2012-05-27 19:58:19
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yunocn

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-31 22:39:11
应该是产品的问题,用过几个公司的都没有出现类似情况。建议确定一下盖温是否正确,太低会有液体蒸发,使眼色变深。
5楼2012-05-28 17:12:21
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xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yunocn at 2012-05-28 17:12:21
应该是产品的问题,用过几个公司的都没有出现类似情况。建议确定一下盖温是否正确,太低会有液体蒸发,使眼色变深。

扩增程序和盖温是没有问题的,而且结果是没有颜色了,不是颜色变深,我怀疑是大肠杆菌代谢的问题,具体还不明白
6楼2012-05-28 18:58:07
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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

前两天我还用了takara的Premix带loading dye的扩过重组子,没有问题啊。。。
7楼2012-05-30 10:51:15
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫

应该是克隆进去的基因原因吧,是什么基因呢?
8楼2012-05-30 11:17:43
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xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by jukongka at 2012-05-30 11:17:43
应该是克隆进去的基因原因吧,是什么基因呢?

18S rDNA啊,奇怪,有的管是没有问题的,有的有问题
9楼2012-05-30 16:09:02
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

挺有意思的问题,楼主不妨试试单纯用菌培养基及单纯用水做模板,看看经过PCR循环会不会褪色。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
10楼2012-05-30 18:46:16
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