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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 用带预染的Mix做大肠杆菌菌液PCR后，大部分EP管中颜色消失！
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xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 用带预染的Mix做大肠杆菌菌液PCR后，大部分EP管中颜色消失！

我将胶回收的DNA片段转入大肠杆菌DH5ɑ后，吸取1微升菌液做PCR检测。
开始采用的是康为的带预染的Mix（蓝色），扩增完成之后发现20管中有15-16管都变成无色透明，而且检测没有目的条带。
后来采用TaKaRa带预染的Mix（绿色），仍然出现类似的现象。
按理说即使没有目的条带，也应该是带原来颜色的，但是竟然变成无色透明的了，小弟实在困惑，难道是大肠杆菌产生了什么次级代谢产物，将染料分解了？？
请各位大侠指点一二！
小弟在此谢过！

[ 来自科研家族 智慧微生物 ]
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1楼 2012-05-27 10:05:42
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何之舟

新虫 (初入文坛)
支持楼主！
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2楼2012-05-27 10:15:09
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xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 何之舟 at 2012-05-27 10:15:09
支持楼主！

谢谢支持，呵呵
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3楼2012-05-27 10:37:31
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dmzha

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也是用的康为的带预染的Mix（蓝色），做大肠杆菌菌液PCR没出现过楼主的情况。
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4楼2012-05-27 19:58:19
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yunocn

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-31 22:39:11
应该是产品的问题，用过几个公司的都没有出现类似情况。建议确定一下盖温是否正确，太低会有液体蒸发，使眼色变深。
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5楼2012-05-28 17:12:21
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xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yunocn at 2012-05-28 17:12:21
应该是产品的问题，用过几个公司的都没有出现类似情况。建议确定一下盖温是否正确，太低会有液体蒸发，使眼色变深。

扩增程序和盖温是没有问题的，而且结果是没有颜色了，不是颜色变深，我怀疑是大肠杆菌代谢的问题，具体还不明白
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6楼2012-05-28 18:58:07
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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)
前两天我还用了takara的Premix带loading dye的扩过重组子，没有问题啊。。。
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7楼2012-05-30 10:51:15
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫
应该是克隆进去的基因原因吧，是什么基因呢？
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8楼2012-05-30 11:17:43
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xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jukongka at 2012-05-30 11:17:43
应该是克隆进去的基因原因吧，是什么基因呢？

18S rDNA啊，奇怪，有的管是没有问题的，有的有问题
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9楼2012-05-30 16:09:02
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

挺有意思的问题，楼主不妨试试单纯用菌培养基及单纯用水做模板，看看经过PCR循环会不会褪色。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
10楼2012-05-30 18:46:16
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