24小时热门版块排行榜

返回列表

shipolande

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 7.2
帖子: 22
在线: 9.2小时
虫号: 1517266

[交流] 土壤细菌DNA PCR问题

请各位大侠们指点一下，小弟我提土壤总DNA准备PCR细菌中一种酶的基因，可以半个月过去了，抑制P不出来条带，我自己感觉模板存在问题的可能性最大，请有经验的大侠们指点一下，土壤提细菌总DNA量一半多少用于PCR合适？提取后是否要稀释？如果模板量不够是否要浓缩？如何把PCR的模板处理好？小弟急啊···望各位哥哥姐姐帮帮小弟吧金币不够··谢谢了·····

回复此楼

» 猜你喜欢

请问哪里可以有青B申请的本子可以借鉴一下。已经有4人回复
真诚求助：手里的省社科项目结项要求主持人一篇中文核心，有什么渠道能发核心吗已经有6人回复
孩子确诊有中度注意力缺陷已经有14人回复
三甲基碘化亚砜的氧化反应已经有4人回复
请问下大家为什么这个铃木偶联几乎不反应呢已经有5人回复
请问有评职称，把科研教学业绩算分排序的高校吗已经有5人回复
2025冷门绝学什么时候出结果已经有3人回复
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入已经有4人回复
康复大学泰山学者周祺惠团队招收博士研究生已经有6人回复
AI论文写作工具：是科研加速器还是学术作弊器？已经有3人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

土壤总细菌16S PCR-条带不亮的问题已经有19人回复
如何测定样品中活体微生物数量？已经有17人回复
救命啊！荧光定量PCR 扩增问题已经有15人回复
关于PCR-DGGE技术，此技术能分析土壤中的真菌吗？用什么引物好？需要注意什么？已经有19人回复
相对定量PCR求助已经有16人回复
求助土壤基因组 PCR 扩增问题已经有30人回复
氨氧化细菌PCR问题已经有14人回复
土壤中含有农药，提取的土壤DNA进行PCR扩增，农药会抑制PCR反应吗已经有5人回复
土壤微生物总DNA提取试剂盒选购已经有29人回复
崩溃了，土壤DNA提取已经有20人回复
【求助/交流】土壤采样及DGGE问题已经有14人回复
【求助/交流】土壤细菌多样性，引物F357GC R518 PCR老是出问题，求救！已经有11人回复
【求助/交流】细菌V3区PCR出现问题，引物为357和518，用于DGGE！已经有8人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:
查看全部散金贴

1楼2012-05-13 16:59:48

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

biofuture

铁虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 53.4
帖子: 202
在线: 28.4小时
虫号: 481203

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

土壤貌似是最好提的用试剂盒直接就提了，用针挑一点土就能提 Mobio 试剂盒易锐试剂盒都能

赞一下

回复此楼

2楼2012-05-13 19:40:56

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

quiller2000

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
shipolande: 金币+1, 十分感谢，我在试试，如再遇到问题还会您请教哈···· 2012-05-21 20:20:10

1，你要确保你的total DNA的干净，没有PCR抑制剂；你可以尝试用细菌的16SrDNA引物扩增试试；
2，你的目标基因在你所分离的DNA中的丰度如何？如果没有文献支撑，你需要将你的DNA做系列稀释，然后寻找合适的模板浓度
3，当然，做着一切之前，你要确保你的引物没有问题，可以用纯培养的DNA测试一下，看看一半需要多少的模板在你的条件下才有有效扩增。

~

赞一下(3人)

回复此楼

3楼2012-05-13 22:17:30

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖