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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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shipolande

新虫 (初入文坛)


[交流] 土壤细菌DNA PCR问题

请各位大侠们指点一下,小弟我提土壤总DNA准备PCR细菌中一种酶的基因,可以半个月过去了,抑制P不出来条带,我自己感觉模板存在问题的可能性最大,请有经验的大侠们指点一下,土壤提细菌总DNA量一半多少用于PCR合适?提取后是否要稀释?如果模板量不够是否要浓缩?如何把PCR的模板处理好?小弟急啊···望各位哥哥姐姐帮帮小弟吧  金币不够··谢谢了·····
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biofuture

铁虫 (小有名气)



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土壤貌似是最好提的  用试剂盒直接就提了, 用针挑一点土就能提 Mobio 试剂盒 易锐 试剂盒 都能
2楼2012-05-13 19:40:56
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★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
shipolande: 金币+1, 十分感谢,我在试试,如再遇到问题还会您请教哈···· 2012-05-21 20:20:10
1,你要确保你的total DNA的干净,没有PCR抑制剂;你可以尝试用细菌的16SrDNA引物扩增试试;
2,你的目标基因在你所分离的DNA中的丰度如何?如果没有文献支撑,你需要将你的DNA做系列稀释,然后寻找合适的模板浓度
3,当然,做着一切之前,你要确保你的引物没有问题,可以用纯培养的DNA测试一下,看看一半需要多少的模板在你的条件下才有有效扩增。

~
3楼2012-05-13 22:17:30
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ct86117

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你用哪个公司的试剂盒?土壤有机质含量多少?
4楼2012-05-14 13:11:25
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damaomao

禁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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5楼2012-05-14 13:22:45
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咖啡杯

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
土壤中大量的腐植酸 会抑制DNA酶的活性,建议你纯化后,稀释p
6楼2012-05-14 18:49:44
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烟波江南

铁虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
首先您得保证DNA的纯度,也就是没有抑制剂存在;另外土壤中的DNA是不好提取的,您得检测DNA的浓度。可以给我提供电泳图片吗?
7楼2012-06-13 22:43:35
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