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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 土壤细菌DNA PCR问题
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shipolande

新虫 (初入文坛)

[交流] 土壤细菌DNA PCR问题

请各位大侠们指点一下，小弟我提土壤总DNA准备PCR细菌中一种酶的基因，可以半个月过去了，抑制P不出来条带，我自己感觉模板存在问题的可能性最大，请有经验的大侠们指点一下，土壤提细菌总DNA量一半多少用于PCR合适？提取后是否要稀释？如果模板量不够是否要浓缩？如何把PCR的模板处理好？小弟急啊···望各位哥哥姐姐帮帮小弟吧  金币不够··谢谢了·····
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1楼 2012-05-13 16:59:48
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biofuture

铁虫 (小有名气)
★
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土壤貌似是最好提的  用试剂盒直接就提了， 用针挑一点土就能提 Mobio 试剂盒 易锐 试剂盒 都能
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2楼2012-05-13 19:40:56
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quiller2000

木虫 (著名写手)
★ ★
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shipolande: 金币+1, 十分感谢，我在试试，如再遇到问题还会您请教哈···· 2012-05-21 20:20:10
1，你要确保你的total DNA的干净，没有PCR抑制剂；你可以尝试用细菌的16SrDNA引物扩增试试；
2，你的目标基因在你所分离的DNA中的丰度如何？如果没有文献支撑，你需要将你的DNA做系列稀释，然后寻找合适的模板浓度
3，当然，做着一切之前，你要确保你的引物没有问题，可以用纯培养的DNA测试一下，看看一半需要多少的模板在你的条件下才有有效扩增。

~
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3楼2012-05-13 22:17:30
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ct86117

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你用哪个公司的试剂盒？土壤有机质含量多少？
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4楼2012-05-14 13:11:25
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damaomao

禁虫 (正式写手)
★
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5楼2012-05-14 13:22:45
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咖啡杯

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
土壤中大量的腐植酸 会抑制DNA酶的活性，建议你纯化后，稀释p
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6楼2012-05-14 18:49:44
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烟波江南

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先您得保证DNA的纯度，也就是没有抑制剂存在；另外土壤中的DNA是不好提取的，您得检测DNA的浓度。可以给我提供电泳图片吗？
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7楼2012-06-13 22:43:35
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