24小时热门版块排行榜    

查看: 1694  |  回复: 9

xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 用带预染的Mix做大肠杆菌菌液PCR后,大部分EP管中颜色消失!

我将胶回收的DNA片段转入大肠杆菌DH5ɑ后,吸取1微升菌液做PCR检测。
开始采用的是康为的带预染的Mix(蓝色),扩增完成之后发现20管中有15-16管都变成无色透明,而且检测没有目的条带。
后来采用TaKaRa带预染的Mix(绿色),仍然出现类似的现象。
按理说即使没有目的条带,也应该是带原来颜色的,但是竟然变成无色透明的了,小弟实在困惑,难道是大肠杆菌产生了什么次级代谢产物,将染料分解了??
请各位大侠指点一二!
小弟在此谢过!

[ 来自科研家族 智慧微生物 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

何之舟

新虫 (初入文坛)

支持楼主!
2楼2012-05-27 10:15:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 何之舟 at 2012-05-27 10:15:09
支持楼主!

谢谢支持,呵呵
3楼2012-05-27 10:37:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmzha

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也是用的康为的带预染的Mix(蓝色),做大肠杆菌菌液PCR没出现过楼主的情况。
4楼2012-05-27 19:58:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yunocn

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-31 22:39:11
应该是产品的问题,用过几个公司的都没有出现类似情况。建议确定一下盖温是否正确,太低会有液体蒸发,使眼色变深。
5楼2012-05-28 17:12:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yunocn at 2012-05-28 17:12:21
应该是产品的问题,用过几个公司的都没有出现类似情况。建议确定一下盖温是否正确,太低会有液体蒸发,使眼色变深。

扩增程序和盖温是没有问题的,而且结果是没有颜色了,不是颜色变深,我怀疑是大肠杆菌代谢的问题,具体还不明白
6楼2012-05-28 18:58:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

前两天我还用了takara的Premix带loading dye的扩过重组子,没有问题啊。。。
7楼2012-05-30 10:51:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫

应该是克隆进去的基因原因吧,是什么基因呢?
8楼2012-05-30 11:17:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by jukongka at 2012-05-30 11:17:43
应该是克隆进去的基因原因吧,是什么基因呢?

18S rDNA啊,奇怪,有的管是没有问题的,有的有问题
9楼2012-05-30 16:09:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

挺有意思的问题,楼主不妨试试单纯用菌培养基及单纯用水做模板,看看经过PCR循环会不会褪色。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
10楼2012-05-30 18:46:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xinongfish 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 285化工学硕求调剂(081700) +8 柴郡猫_ 2026-03-12 8/400 2026-03-17 09:44 by peike
[考研] 211本,11408一志愿中科院277分,曾在中科院自动化所实习 +4 Losir 2026-03-12 5/250 2026-03-17 09:39 by maohhh123
[考研] 302求调剂 +8 负心者当诛 2026-03-11 8/400 2026-03-17 09:05 by 哦哦123
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +14 不知道叫什么! 2026-03-15 16/800 2026-03-17 08:59 by relum
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:12 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 牛乳糖的卡卡 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:05 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123! 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
信息提示
请填处理意见