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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » （求助）蛋白质双向电泳胶显色后怎么会跑成这个样子。。。
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pangzikh

新虫 (初入文坛)

[交流] （求助）蛋白质双向电泳胶显色后怎么会跑成这个样子。。。

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求各路大神帮忙看下我的蛋白质双向电泳胶显色后怎么会跑成这个样子？是胶配的有问题吗？还是其他问题，求分析，谢谢~~~
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1楼 2012-06-07 18:41:24
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回帖置顶 ( 共有3个 )

pangzikh

新虫 (初入文坛)
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pangzikh: 回帖置顶 2012-06-08 09:47:24
引用回帖:
2楼: Originally posted by 秋日@恋歌 at 2012-06-08 03:10:52
我觉得不是你染色的问题 而是配胶和点样的问题

染色应该没问题，蛋白跑成什么样子，染色就染成什么样子。顶多就是染色深浅和背景颜色。所以说还是蛋白跑的有问题，你看maker都跑歪了。关于点样，我用的是胶条跑的是双向。等电聚焦有没有问题不好说，但二向肯定有问题，要么是胶配的有问题，要么是电泳过程有问题，还有一种可能是胶条和胶面结合不紧密。
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4楼2012-06-08 09:09:47
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lzh860801

金虫 (正式写手)
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pangzikh: 金币+5 2012-06-11 12:05:58
pangzikh: 回帖置顶 2012-06-11 12:17:14
银染的吧
上面是小分子 下面是大分子？
上样量太大 或者是你的蛋白有降解，基本只有高丰度的蛋白点啊。胶面看起来还是比较干净的，跑出来的点也基本没有横拖纵拖，所以一向的聚焦应该没什么问题。整个来说的话，如果LZ的样品蛋白点本来就不多，那么试着减少上样量 或是换其他染色方法试试，如果本来期待的蛋白点比较多，那么估计得改进蛋白提取方案，去高丰度或是换大胶了（我感觉LZ的象7cm的胶）。总的说来LZ聚焦问题不大 二向转的也可以，至于楼上说的那什么MARKer歪了，胶面大弧条，其实在2D中很常见也不重要。
加油，还是很有希望的！
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pangzikh
6楼2012-06-08 10:31:43
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pangzikh

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
pangzikh: 回帖置顶 2012-06-11 12:18:15
引用回帖:
6楼: Originally posted by lzh860801 at 2012-06-08 10:31:43
银染的吧
上面是小分子 下面是大分子？
上样量太大 或者是你的蛋白有降解，基本只有高丰度的蛋白点啊。胶面看起来还是比较干净的，跑出来的点也基本没有横拖纵拖，所以一向的聚焦应该没什么问题。整个来说的话，如 ...

是银染胶也是18cm大胶，这个样品是鸭血清蛋白，已经用试剂盒去过高丰度了，预实验跑的7cm小胶效果相当好，点也很多。除非我上错样品，否则不应该跑成这样，有没有可能是胶配的有问题 ，我一直怀疑是配胶的时候SDS加的量不对，导致蛋白点没跑开？或者电泳液配的有问题？电流电压有问题？麻烦再分析一下~~
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7楼2012-06-11 12:17:10
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秋日@恋歌

银虫 (小有名气)
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我觉得不是你染色的问题 而是配胶和点样的问题
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pangzikh
2楼2012-06-08 03:10:52
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439864925

金虫 (初入文坛)
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pangzikh: 金币+3, 盐离子含量高，一般跑出来的二向应该是有拖尾和横纹吧 2012-06-11 12:04:41
marker是没问题的.可能是样品中盐离子含量过高
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3楼2012-06-08 07:10:17
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pangzikh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 439864925 at 2012-06-08 07:10:17
marker是没问题的.可能是样品中盐离子含量过高

maker都跑歪了 而且你看胶上部分明显有条大弧线
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5楼2012-06-08 09:11:24
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lzh860801

金虫 (正式写手)
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引用回帖:
7楼: Originally posted by pangzikh at 2012-06-11 12:17:10
是银染胶也是18cm大胶，这个样品是鸭血清蛋白，已经用试剂盒去过高丰度了，预实验跑的7cm小胶效果相当好，点也很多。除非我上错样品，否则不应该跑成这样，有没有可能是胶配的有问题 ，我一直怀疑是配胶的时候SDS加 ...

电泳液以及电流电压是否有问题我不清楚，因为没遇到过这种情况，你也没给出你的实验条件，只遇到过电泳液脏的话胶面就很难看，
但是SDS加的量不对这一点应该是不会影响的，实际上跑蛋白的时候只要样品里有SDS ，胶里面有没有差别不大。
再就是LZ的样品放了多久，是否反复冻融，这些都可能影响样品质量。
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8楼2012-06-12 09:05:33
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314243568

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
其实，楼主用银染想看到所有的蛋白是很好的方法，但是样品上样量相对于银染法来说太多了。。。，显色太久了。。。或者如楼上的说你高丰度的蛋白没有去处。。。。但你又说做了高丰度去处了。。。可能是你上错样了。。
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9楼2012-08-16 03:05:17
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学术茹

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主做血液蛋白，我也是做体液的 可是我的蛋白点就很少，就怀疑提取蛋白方法有问题，请教楼主蛋白提取方法呀！！！！做了一年多了 双向真心折麽人呀！！！谢谢楼主啦呀 万分感谢呀
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10楼2014-07-30 12:31:28
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创逝者

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我做的是植物根蛋白质提取，含量也一直上不去。还一年毕业纠结中。楼主有好方法么？
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11楼2015-04-12 12:24:14
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