应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 银染色聚丙烯酰胺凝胶电泳
141/2返回列表12下一页
查看: 3644  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yanfeier

金虫 (小有名气)

[求助] 银染色聚丙烯酰胺凝胶电泳

想问问各位谁做过银染色聚丙烯酰胺凝胶电泳，其中在试验过程中胶的做法和之前鉴定蛋白PAGE胶区别在哪里，以及对样品的要求等等，求大侠指教，我主要是想做多态性分析的。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-04-24 10:11:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-24 13:49:05
yanfeier: 金币+5 2012-04-24 16:12:54
不分浓缩胶与分离胶，我把我们10%配方给你
                 60ml
40%丙烯酰胺    15ml
H2O                   38.4ml
10*TBE                6ml
10%APS             0.6ml
TEMED              48.75ul
160v电泳 1h 银染照相
我实验室就采用这种方式。
赞一下(2人) 回复此楼
hehe
4楼2012-04-24 11:45:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 可否详细点呢 2012-04-24 11:38:06
银染色聚丙烯酰胺凝胶跟PAGE胶一样。只是染色观察不同。
赞一下(1人) 回复此楼
hehe
2楼2012-04-24 10:22:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanfeier

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2012-04-24 10:22:15:
银染色聚丙烯酰胺凝胶跟PAGE胶一样。只是染色观察不同。

那我看的文献上面直接说用10%变性聚丙烯酰胺凝胶，这个不分浓缩胶与分离胶吗？还有就是它的跑胶条件也不尽相同，所以就不明白了。是否可以帮忙解释下。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-04-24 11:24:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanfeier

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lvbobo823 at 2012-04-24 11:45:08:
不分浓缩胶与分离胶，我把我们10%配方给你
                 60ml
40%丙烯酰胺    15ml
H2O                   38.4ml
10*TBE                6ml
10%APS             0.6ml
TEMED              48.75ul
...

谢谢你，但是我看你们的配方和跑蛋白的PAGE还是有点不一样，是TBE（与TAE区别，我只在琼脂糖电泳里面用过）？不用Tris-Hcl吗？直接也不用调电压，银染完了之后不就是直接显色吗？照相？  我对这个实验流程还没有实际操作过，对于整体的实验流程还不是很熟悉。你们跑完胶之后，具体每一步的操作和时间是怎么安排的？比如说固定液、银染液以及显色液配方和每步的时间等等，能不能耽误你点时间，给我讲讲。拜托了。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-04-24 12:26:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yanfeier: 金币+5 2012-04-24 16:12:58
TBE配方可以在分子克隆那本书上查到网上也容易搜到，我就不给你细说了。
银染过程是：
1.电泳完毕后，取下胶水洗1min
2.银染(1g AgNO3+1L H2O)至少8min
3.再水洗1min
4.把胶转移到NaOH显影液中（16g NaOH+8ml 甲醛+1L H2O），边染色边观察直到显出带时，把胶转移到Na2CO3溶液（7.5g Na2CO3+1L H2O）终止反应2min
5.放入稍些水中照相。
赞一下(1人) 回复此楼
hehe
6楼2012-04-24 14:10:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanfeier

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yanfeier at 2012-04-24 12:26:16:
谢谢你，但是我看你们的配方和跑蛋白的PAGE还是有点不一样，是TBE（与TAE区别，我只在琼脂糖电泳里面用过）？不用Tris-Hcl吗？直接也不用调电压，银染完了之后不就是直接显色吗？照相？  我对这个实验流程还没有 ...

那PCR产物上胶跑之前是不是也的加入5*loadingbuffer煮沸呢？
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2012-04-24 14:29:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

syct

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yanfeier at 2012-04-24 14:29:28:
那PCR产物上胶跑之前是不是也的加入5*loadingbuffer煮沸呢？

PCR产物跑胶前煮沸？
赞一下 回复此楼
8楼2012-04-25 01:00:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)
晕，你到底是要跑核酸还是跑蛋白啊。
银染是用来染蛋白的。染核酸用EB不就行了
赞一下 回复此楼
9楼2012-04-25 08:25:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanfeier

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by dnaxxx at 2012-04-25 08:25:29:
晕，你到底是要跑核酸还是跑蛋白啊。
银染是用来染蛋白的。染核酸用EB不就行了

可能是我描述的不清楚,你理解错我的意思了。不好意思
赞一下 回复此楼
10楼2012-04-25 10:37:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yanfeier 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode +5 等待解的谜 2026-08-06 7/350 2026-08-06 13:21 by 苏知砚
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +3 Tide man 2026-08-06 4/200 2026-08-06 13:08 by loufangrui
[基金申请] filecode +3 布布和一二 2026-08-06 5/250 2026-08-06 13:00 by 且听虎啸
[基金申请] 求各位大神看下 100+5 hpkpkpkp 2026-08-05 31/1550 2026-08-06 12:34 by yang182083
[教师之家] 咨询面上基金 +4 李长云 2026-07-31 7/350 2026-08-06 11:20 by 李长云
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 11/550 2026-08-05 19:16 by kf2781974
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +22 低垂的野花 2026-07-31 30/1500 2026-08-05 18:03 by 低垂的野花
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[高分子] UV压敏胶开发 +5 ichall 2026-07-30 7/350 2026-08-05 08:36 by 一痕胶色
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭