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yanfeier

金虫 (小有名气)

[求助] 银染色聚丙烯酰胺凝胶电泳

想问问各位谁做过银染色聚丙烯酰胺凝胶电泳,其中在试验过程中胶的做法和之前鉴定蛋白PAGE胶区别在哪里,以及对样品的要求等等,求大侠指教,我主要是想做多态性分析的。
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yanfeier: 金币+5 2012-04-24 16:12:58
TBE配方可以在分子克隆那本书上查到网上也容易搜到,我就不给你细说了。
银染过程是:
1.电泳完毕后,取下胶水洗1min
2.银染(1g AgNO3+1L H2O)至少8min
3.再水洗1min
4.把胶转移到NaOH显影液中(16g NaOH+8ml 甲醛+1L H2O),边染色边观察直到显出带时,把胶转移到Na2CO3溶液(7.5g Na2CO3+1L H2O)终止反应2min
5.放入稍些水中照相。
hehe
6楼2012-04-24 14:10:02
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 可否详细点呢 2012-04-24 11:38:06
银染色聚丙烯酰胺凝胶跟PAGE胶一样。只是染色观察不同。
hehe
2楼2012-04-24 10:22:15
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yanfeier

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2012-04-24 10:22:15:
银染色聚丙烯酰胺凝胶跟PAGE胶一样。只是染色观察不同。

那我看的文献上面直接说用10%变性聚丙烯酰胺凝胶,这个不分浓缩胶与分离胶吗?还有就是它的跑胶条件也不尽相同,所以就不明白了。是否可以帮忙解释下。
3楼2012-04-24 11:24:34
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-24 13:49:05
yanfeier: 金币+5 2012-04-24 16:12:54
不分浓缩胶与分离胶,我把我们10%配方给你
                 60ml
40%丙烯酰胺    15ml
H2O                   38.4ml
10*TBE                6ml
10%APS             0.6ml
TEMED              48.75ul
160v电泳 1h 银染照相
我实验室就采用这种方式。
hehe
4楼2012-04-24 11:45:08
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