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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 请问做PAGE电泳MARKER总是跑不开，不知道为什么，请高手指教
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xingrui314

新虫 (小有名气)

[求助] 请问做PAGE电泳MARKER总是跑不开，不知道为什么，请高手指教 已有3人参与

请问做PAGE电泳MARKER最上面的两条总是跑不开，今天做了一板SDS胶结果连Marker都看不到条带，不知道为什么，请高手指教，因为这个已经重复做了好多次了，结果还是一样，都不知道该怎么办？谢谢啦。
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1楼 2014-08-11 19:19:37
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-08-13 21:30:07
xingrui314: 金币+3, ★有帮助 2014-08-25 15:57:13
提供的信息太少，无从判断。
你的胶是自己配的还是pre－casted（买来现成的）？浓度是多少？梯度胶？running buffer？新鲜还是用过多次了？ Marker是什么？最大的有多大？
重复性这么好说明你某个环节出了问题，暂时不要重复了，逐个排除一下（每次改变一个条件）看看。
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2楼2014-08-11 21:18:47
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冷月絮清风

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-08-13 21:30:10
xingrui314: 金币+2 2014-08-25 15:57:36
你的分离胶浓度是多少？跑胶的电压（电流）是多少？跑多长时间？电泳液的配方？是否新配？以上都会影响SDS-PAGE中蛋白的涌动。一般分离胶的浓度小（8% or 10%），电压120V 2h，新配的电泳液，只要marker本身没用质量问题，都能跑出来的。
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不偷懒，不拖拉
3楼2014-08-11 23:00:26
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pengchenping

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-13 21:30:14
xingrui314: 金币+2 2014-08-25 15:57:55
可能是你的胶浓度太大，分子量大的条带分不开也是可能的。我跑过15％的胶，245kd的分的开。不知你是啥情况，或者发个图

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-08-13 14:55:39
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xingrui314

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-11 21:18:47
提供的信息太少，无从判断。
你的胶是自己配的还是pre－casted（买来现成的）？浓度是多少？梯度胶？running buffer？新鲜还是用过多次了？ Marker是什么？最大的有多大？
重复性这么好说明你某个环节出了问题，暂 ...

恩，谢谢。我的胶都是自己配的，后来SDS的marker出来了，就是PAGE的还是分不开，12%分离胶，5%浓缩胶，Marker最大是116KDa
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5楼2014-08-25 15:50:38
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xingrui314

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冷月絮清风 at 2014-08-11 23:00:26
你的分离胶浓度是多少？跑胶的电压（电流）是多少？跑多长时间？电泳液的配方？是否新配？以上都会影响SDS-PAGE中蛋白的涌动。一般分离胶的浓度小（8% or 10%），电压120V 2h，新配的电泳液，只要marker本身没用质量 ...

谢谢，现在我的SDS的Marker跑出来了,就是PAGE还是分不开，感觉用的都是新的，没什么问题
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6楼2014-08-25 15:52:31
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xingrui314

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by pengchenping at 2014-08-13 14:55:39
可能是你的胶浓度太大，分子量大的条带分不开也是可能的。我跑过15％的胶，245kd的分的开。不知你是啥情况，或者发个图

谢谢你。我用的是12%的分离胶，116KD的，SDS的分开了，现在就是PAGE的仍然分不开
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7楼2014-08-25 15:55:08
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