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xingrui314

新虫 (小有名气)

[求助] 请问做PAGE电泳MARKER总是跑不开,不知道为什么,请高手指教 已有3人参与

请问做PAGE电泳MARKER最上面的两条总是跑不开,今天做了一板SDS胶结果连Marker都看不到条带,不知道为什么,请高手指教,因为这个已经重复做了好多次了,结果还是一样,都不知道该怎么办?谢谢啦。
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-08-13 21:30:07
xingrui314: 金币+3, 有帮助 2014-08-25 15:57:13
提供的信息太少,无从判断。
你的胶是自己配的还是pre-casted(买来现成的)?浓度是多少?梯度胶?running buffer?新鲜还是用过多次了? Marker是什么?最大的有多大?
重复性这么好说明你某个环节出了问题,暂时不要重复了,逐个排除一下(每次改变一个条件)看看。
2楼2014-08-11 21:18:47
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冷月絮清风

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-08-13 21:30:10
xingrui314: 金币+2 2014-08-25 15:57:36
你的分离胶浓度是多少?跑胶的电压(电流)是多少?跑多长时间?电泳液的配方?是否新配?以上都会影响SDS-PAGE中蛋白的涌动。一般分离胶的浓度小(8% or 10%),电压120V 2h,新配的电泳液,只要marker本身没用质量问题,都能跑出来的。
不偷懒,不拖拉
3楼2014-08-11 23:00:26
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pengchenping

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-13 21:30:14
xingrui314: 金币+2 2014-08-25 15:57:55
可能是你的胶浓度太大,分子量大的条带分不开也是可能的。我跑过15%的胶,245kd的分的开。不知你是啥情况,或者发个图

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-08-13 14:55:39
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xingrui314

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-11 21:18:47
提供的信息太少,无从判断。
你的胶是自己配的还是pre-casted(买来现成的)?浓度是多少?梯度胶?running buffer?新鲜还是用过多次了? Marker是什么?最大的有多大?
重复性这么好说明你某个环节出了问题,暂 ...

恩,谢谢。我的胶都是自己配的,后来SDS的marker出来了,就是PAGE的还是分不开,12%分离胶,5%浓缩胶,Marker最大是116KDa
5楼2014-08-25 15:50:38
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xingrui314

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 冷月絮清风 at 2014-08-11 23:00:26
你的分离胶浓度是多少?跑胶的电压(电流)是多少?跑多长时间?电泳液的配方?是否新配?以上都会影响SDS-PAGE中蛋白的涌动。一般分离胶的浓度小(8% or 10%),电压120V 2h,新配的电泳液,只要marker本身没用质量 ...

谢谢,现在我的SDS的Marker跑出来了,就是PAGE还是分不开,感觉用的都是新的,没什么问题
6楼2014-08-25 15:52:31
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xingrui314

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by pengchenping at 2014-08-13 14:55:39
可能是你的胶浓度太大,分子量大的条带分不开也是可能的。我跑过15%的胶,245kd的分的开。不知你是啥情况,或者发个图

谢谢你。我用的是12%的分离胶,116KD的,SDS的分开了,现在就是PAGE的仍然分不开
7楼2014-08-25 15:55:08
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