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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE蛋白Marker总是歪掉，有图为证，请高手指教
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jiangyinshen

木虫 (著名写手)

[求助] SDS-PAGE蛋白Marker总是歪掉，有图为证，请高手指教

求助各位高手，SDS-PAGE电泳结果总是这种样子，已经连续五次这样了，去离子水新制备的，pH8.8和pH6.8的Tris-HCl都是春节后订的，SDS和APS也是现配的，TEMED新订的，只有30%Arc-Bis是去年的，这些试剂中该放4度的都一直放在4度，我想不通到底是哪里出了问题，会不会是30%Arc-Bis过期了，请各位高手不吝指教，谢谢！

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不是風動，亦非幡動，仁者心動
1楼 2013-04-15 13:58:46
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bunny0512

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-04-17 08:22:01
jiangyinshen: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-04-17 15:41:00
这个是预染marker，以前做过很多次，原因俩，第一配置的胶没有混匀，第二，缓冲液有问题。这样出来不仅marker是歪的，连样品也是歪的。。。巨难看，还有样孔尽量平整。
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在哪里~在哪里见过你~
6楼2013-04-16 10:38:29
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
应该是凝胶配的不好，可能是凝胶聚合不均匀、有气泡、电渗流、胶底部有空隙等原因，导致电泳时电压与电流在凝胶中不均匀，换块凝胶试试看吧。再有就是缓冲溶液有些问题，导致电泳时电压与电流在凝胶中不均匀。

这是我在分子生物的一帖的回答，跟你的情况有些类似，那个是DNA电泳，不过原理原理差距不大。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

jiangyinshen
13楼2013-04-17 23:42:37
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普通回帖

DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+10, 传说中的处女贴，奖励是必须的！ 2013-04-15 17:14:52
我也不是特别的会，提一下小建议1.电泳液要是旧的话配点新的看下。2.丙烯酰胺储液换个新的看下。3.电压要是太高的话调低点看看。80V浓缩120分离看下。胶的浓度换个和MAKER要求一样的看下
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2楼2013-04-15 16:57:04
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chinatiger

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-16 07:21:54
jiangyinshen: 金币+2, ★有帮助 2013-04-17 15:40:11
主要还是凝胶均一性不好，缓冲液最好新鲜配置
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3楼2013-04-16 00:03:06
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-04-16 07:22:13
很多商品化的marker已经经过处理了，可以直接上样跑。但是公司处理marker的溶液往往与实验室自己配置的不同。所以处理好的marker需要稀释到上样缓冲液里。此外空白泳道不要什么都不点，需要上同体积的上样缓冲液保持平衡。
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4楼2013-04-16 04:07:17
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running113

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-17 08:21:46
感觉像电压不稳似的。有没有换个电泳仪试一下？
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SCI我来了！！！
5楼2013-04-16 10:00:55
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Jathan

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 鼓励新虫应助 2013-04-17 08:22:38
你跑的电压可能太高了，胶有可能有熔的迹象。第二也可能是电压不稳，一般跑胶最好用一台电泳仪，不要与其他人合用一台，否则因电压和电流不稳，样品都可能跑偏。。。
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7楼2013-04-16 10:58:08
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tiu007

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-17 08:23:11
我觉得是胶的问题，重新配制下试试看！
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8楼2013-04-16 13:20:13
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cyrilmm

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, good point 2013-04-17 08:22:59
可能是marker与旁边孔的上样量不同，如果不加样品，也可以加等量的loding buffer
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9楼2013-04-16 16:58:21
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真行刘

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 能说说为什么说样品和胶没有问题吗？ 2013-04-17 08:23:56
你的样品和胶都是没有问题的，问题在于你点样的操作。
在点样的过程中，与你的样品或Marker向邻近的空也要点上相同体积的上样缓冲液，这样你跑的样就不会变宽了。
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10楼2013-04-16 16:59:40
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