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ming827

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助,SDS-PAGE电泳图(Marker最后一个条带跑不出,胶底部很奇怪)

12%分离胶110V,4%浓缩胶70V,Marker共10条,但是最后一条基本看不见,胶底部很奇怪不明原因,求高手指点!~~


2012.12.6.jpg

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544534326

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
ming827: 金币+5, 博学EPI+1, 有帮助 2012-12-10 16:18:53
引用回帖:
2楼: Originally posted by ming827 at 2012-12-06 18:48:12
提的是对虾肌肉全蛋白,用裂解液提取,但是底部不明白为什么会出现这种状况,是蛋白样品的问题还是电泳的问题,求高手指点指点!~

有没有做重复试验呢?若重复还是如此,可能是因为裂解液的ph值与电极缓冲液差别太大,离子有些漂移。。。。
人活着就要保持一种劳作的状态!
3楼2012-12-06 19:37:25
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普通回帖

ming827

铁虫 (初入文坛)

提的是对虾肌肉全蛋白,用裂解液提取,但是底部不明白为什么会出现这种状况,是蛋白样品的问题还是电泳的问题,求高手指点指点!~
2楼2012-12-06 18:48:12
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ming827

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 544534326 at 2012-12-06 19:37:25
有没有做重复试验呢?若重复还是如此,可能是因为裂解液的ph值与电极缓冲液差别太大,离子有些漂移。。。。...

有做,几次都是这样,底部都出现这个问题,而且Marker的最后一个条带总也跑不出,如何解决呢?
4楼2012-12-06 20:29:47
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yangyu790112

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
ming827: 金币+5, 有帮助 2012-12-10 16:19:08
引用回帖:
3楼: Originally posted by 544534326 at 2012-12-06 19:37:25
有没有做重复试验呢?若重复还是如此,可能是因为裂解液的ph值与电极缓冲液差别太大,离子有些漂移。。。。...

基本同意3楼的想法,不知道你的裂解液的成分是什么,建议可以用pH近中性的缓冲液(TE或Tris)换一下你的样品的缓冲体系,在跑一次。
生物化学
5楼2012-12-06 21:02:20
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ming827

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yangyu790112 at 2012-12-06 21:02:20
基本同意3楼的想法,不知道你的裂解液的成分是什么,建议可以用pH近中性的缓冲液(TE或Tris)换一下你的样品的缓冲体系,在跑一次。...

8M尿素,2M硫脲,4%CHAPS,1%DTT,1%IPG-Buffer。刚接触这方面的知识,不是很了解,能详细说说吗,如何换,是替换成分中的试剂?替换哪种?谢谢指导!
6楼2012-12-06 21:42:32
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yangyu790112

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by ming827 at 2012-12-06 21:42:32
8M尿素,2M硫脲,4%CHAPS,1%DTT,1%IPG-Buffer。刚接触这方面的知识,不是很了解,能详细说说吗,如何换,是替换成分中的试剂?替换哪种?谢谢指导!...

8M尿素会导致样品盐浓度过高,换缓冲液,并不是指替换裂解液中的某种成分,而是先正常进行样品裂解,再用温和的缓冲体系替换样品溶液中的裂解液成分(即除盐),如果你的实验室有超滤离心管,工作原理非常简单,试试吧!
生物化学
7楼2012-12-07 00:59:28
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544534326

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by ming827 at 2012-12-06 21:42:32
8M尿素,2M硫脲,4%CHAPS,1%DTT,1%IPG-Buffer。刚接触这方面的知识,不是很了解,能详细说说吗,如何换,是替换成分中的试剂?替换哪种?谢谢指导!...

的确离子浓度过高
人活着就要保持一种劳作的状态!
8楼2012-12-07 10:06:39
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ming827

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yangyu790112 at 2012-12-07 00:59:28
8M尿素会导致样品盐浓度过高,换缓冲液,并不是指替换裂解液中的某种成分,而是先正常进行样品裂解,再用温和的缓冲体系替换样品溶液中的裂解液成分(即除盐),如果你的实验室有超滤离心管,工作原理非常简单,试 ...

那降低尿素的浓度会有改善吗?是因为尿素过高导致这个结果的?是这个原因吗?您的意思我明白了,但是能不能不换缓冲液体系而解决这个问题呢?
9楼2012-12-07 10:41:16
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ming827

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 544534326 at 2012-12-07 10:06:39
的确离子浓度过高...

请问如何解决呢?
10楼2012-12-07 10:42:34
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