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小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答完结子版 » 求助，SDS-PAGE电泳图（Marker最后一个条带跑不出，胶底部很奇怪）
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ming827

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助，SDS-PAGE电泳图（Marker最后一个条带跑不出，胶底部很奇怪）

12%分离胶110V，4%浓缩胶70V，Marker共10条，但是最后一条基本看不见，胶底部很奇怪不明原因，求高手指点！~~


2012.12.6.jpg
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1楼 2012-12-06 18:43:35
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ming827

铁虫 (初入文坛)
提的是对虾肌肉全蛋白，用裂解液提取，但是底部不明白为什么会出现这种状况，是蛋白样品的问题还是电泳的问题，求高手指点指点！~
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2楼2012-12-06 18:48:12
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544534326

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
ming827: 金币+5, 博学EPI+1, ★有帮助 2012-12-10 16:18:53
引用回帖:
2楼: Originally posted by ming827 at 2012-12-06 18:48:12
提的是对虾肌肉全蛋白，用裂解液提取，但是底部不明白为什么会出现这种状况，是蛋白样品的问题还是电泳的问题，求高手指点指点！~

有没有做重复试验呢？若重复还是如此，可能是因为裂解液的ph值与电极缓冲液差别太大，离子有些漂移。。。。
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人活着就要保持一种劳作的状态！
3楼2012-12-06 19:37:25
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ming827

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 544534326 at 2012-12-06 19:37:25
有没有做重复试验呢？若重复还是如此，可能是因为裂解液的ph值与电极缓冲液差别太大，离子有些漂移。。。。...

有做，几次都是这样，底部都出现这个问题，而且Marker的最后一个条带总也跑不出，如何解决呢？
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4楼2012-12-06 20:29:47
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yangyu790112

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
ming827: 金币+5, ★有帮助 2012-12-10 16:19:08
引用回帖:
3楼: Originally posted by 544534326 at 2012-12-06 19:37:25
有没有做重复试验呢？若重复还是如此，可能是因为裂解液的ph值与电极缓冲液差别太大，离子有些漂移。。。。...

基本同意3楼的想法，不知道你的裂解液的成分是什么，建议可以用pH近中性的缓冲液（TE或Tris）换一下你的样品的缓冲体系，在跑一次。
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生物化学
5楼2012-12-06 21:02:20
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ming827

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yangyu790112 at 2012-12-06 21:02:20
基本同意3楼的想法，不知道你的裂解液的成分是什么，建议可以用pH近中性的缓冲液（TE或Tris）换一下你的样品的缓冲体系，在跑一次。...

8M尿素，2M硫脲，4%CHAPS，1%DTT,1%IPG-Buffer。刚接触这方面的知识，不是很了解，能详细说说吗，如何换，是替换成分中的试剂？替换哪种？谢谢指导！
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6楼2012-12-06 21:42:32
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yangyu790112

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by ming827 at 2012-12-06 21:42:32
8M尿素，2M硫脲，4%CHAPS，1%DTT,1%IPG-Buffer。刚接触这方面的知识，不是很了解，能详细说说吗，如何换，是替换成分中的试剂？替换哪种？谢谢指导！...

8M尿素会导致样品盐浓度过高，换缓冲液，并不是指替换裂解液中的某种成分，而是先正常进行样品裂解，再用温和的缓冲体系替换样品溶液中的裂解液成分（即除盐），如果你的实验室有超滤离心管，工作原理非常简单，试试吧！
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生物化学
7楼2012-12-07 00:59:28
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544534326

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by ming827 at 2012-12-06 21:42:32
8M尿素，2M硫脲，4%CHAPS，1%DTT,1%IPG-Buffer。刚接触这方面的知识，不是很了解，能详细说说吗，如何换，是替换成分中的试剂？替换哪种？谢谢指导！...

的确离子浓度过高
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人活着就要保持一种劳作的状态！
8楼2012-12-07 10:06:39
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ming827

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yangyu790112 at 2012-12-07 00:59:28
8M尿素会导致样品盐浓度过高，换缓冲液，并不是指替换裂解液中的某种成分，而是先正常进行样品裂解，再用温和的缓冲体系替换样品溶液中的裂解液成分（即除盐），如果你的实验室有超滤离心管，工作原理非常简单，试 ...

那降低尿素的浓度会有改善吗？是因为尿素过高导致这个结果的？是这个原因吗？您的意思我明白了，但是能不能不换缓冲液体系而解决这个问题呢？
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9楼2012-12-07 10:41:16
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ming827

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 544534326 at 2012-12-07 10:06:39
的确离子浓度过高...

请问如何解决呢？
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10楼2012-12-07 10:42:34
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