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jiangyinshen

木虫 (著名写手)

[求助] SDS-PAGE蛋白Marker总是歪掉,有图为证,请高手指教

求助各位高手,SDS-PAGE电泳结果总是这种样子,已经连续五次这样了,去离子水新制备的,pH8.8和pH6.8的Tris-HCl都是春节后订的,SDS和APS也是现配的,TEMED新订的,只有30%Arc-Bis是去年的,这些试剂中该放4度的都一直放在4度,我想不通到底是哪里出了问题,会不会是30%Arc-Bis过期了,请各位高手不吝指教,谢谢!

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bunny0512

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-04-17 08:22:01
jiangyinshen: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-04-17 15:41:00
这个是预染marker,以前做过很多次,原因俩,第一配置的胶没有混匀,第二,缓冲液有问题。这样出来不仅marker是歪的,连样品也是歪的。。。巨难看,还有样孔尽量平整。
在哪里~在哪里见过你~
6楼2013-04-16 10:38:29
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

应该是凝胶配的不好,可能是凝胶聚合不均匀、有气泡、电渗流、胶底部有空隙等原因,导致电泳时电压与电流在凝胶中不均匀,换块凝胶试试看吧。再有就是缓冲溶液有些问题,导致电泳时电压与电流在凝胶中不均匀。

这是我在分子生物的一帖的回答,跟你的情况有些类似,那个是DNA电泳,不过原理原理差距不大。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

13楼2013-04-17 23:42:37
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普通回帖

DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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yqbter: 金币+10, 传说中的处女贴,奖励是必须的! 2013-04-15 17:14:52
我也不是特别的会,提一下小建议1.电泳液要是旧的话配点新的看下。2.丙烯酰胺储液换个新的看下。3.电压要是太高的话调低点看看。80V浓缩120分离看下。胶的浓度换个和MAKER要求一样的看下
2楼2013-04-15 16:57:04
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chinatiger

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-16 07:21:54
jiangyinshen: 金币+2, 有帮助 2013-04-17 15:40:11
主要还是凝胶均一性不好,缓冲液最好新鲜配置
3楼2013-04-16 00:03:06
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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★ ★
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wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-04-16 07:22:13
很多商品化的marker已经经过处理了,可以直接上样跑。但是公司处理marker的溶液往往与实验室自己配置的不同。所以处理好的marker需要稀释到上样缓冲液里。此外空白泳道不要什么都不点,需要上同体积的上样缓冲液保持平衡。
4楼2013-04-16 04:07:17
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running113

木虫 (著名写手)

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感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-17 08:21:46
感觉像电压不稳似的。有没有换个电泳仪试一下?
SCI我来了!!!
5楼2013-04-16 10:00:55
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Jathan

新虫 (小有名气)

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wizardfan: 金币+3, 鼓励新虫应助 2013-04-17 08:22:38
你跑的电压可能太高了,胶有可能有熔的迹象。第二也可能是电压不稳,一般跑胶最好用一台电泳仪,不要与其他人合用一台,否则因电压和电流不稳,样品都可能跑偏。。。
7楼2013-04-16 10:58:08
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tiu007

银虫 (小有名气)

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wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-17 08:23:11
我觉得是胶的问题,重新配制下试试看!
8楼2013-04-16 13:20:13
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cyrilmm

铜虫 (初入文坛)

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wizardfan: 金币+1, good point 2013-04-17 08:22:59
可能是marker与旁边孔的上样量不同,如果不加样品,也可以加等量的loding buffer
9楼2013-04-16 16:58:21
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真行刘

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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wizardfan: 金币+2, 能说说为什么说样品和胶没有问题吗? 2013-04-17 08:23:56
你的样品和胶都是没有问题的,问题在于你点样的操作。
在点样的过程中,与你的样品或Marker向邻近的空也要点上相同体积的上样缓冲液,这样你跑的样就不会变宽了。
10楼2013-04-16 16:59:40
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