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月落星沉

银虫 (初入文坛)

[求助] 求教一个关于SDS-PAGE电泳的问题(电泳条带的重影以及marker最后一条带跑不出来)

我的蛋白电泳中出现一些不该出现的条带,像重影一样。
在marker(中间的条带),和样品(2边的条带)中都有出现,比正常条带要细一些,淡一些。所以现在搞不清样品的2条带是拖尾了还是2种蛋白。这种现象要如何消除?
(我用的是3%的浓缩胶,10%的分离胶,上样量10μl,电泳开始时电压80V,然后调到160V,大约1h。)
另外,marker应该是6条带,但只跑出了5条带,最下面12KDa的带不见了,最下面出现的长长的,颜色略深的带到底是什么啊?
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-24 21:45:12
月落星沉: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-08-26 09:33:37
先说你的Marker的问题。最后一条带没有,是因为你跑胶的时间太长了Marker跑出去了。至于胶上面最后一条长长的带,是你电泳之后染色染上去的,正好在你电泳结束的地方。一般跑胶都会有,不用在意。

看你的样品和Marker在中间部位都有杂带,但是Marker的下方就没有。感觉应该不像是胶的问题。不过如果你不放心可以重新配置一块胶,再跑一次,如果还是出现这样的情况,基本可以断定为那是你的样品不纯,那些细小的条带是杂带。至于Marker,很有可能被污染了,你可以点一个新Marker对比一下。
2楼2012-08-24 14:51:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
Marker一般是已知分子量的蛋白质,为了易得,一般是重组表达的,纯化后混合成商品。为了节省成本,一般不会纯化得太纯,有细微杂带是很正常的。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2012-08-24 17:44:13
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zq347597638

新虫 (小有名气)

问题不懂  踩踩
4楼2012-11-22 17:19:26
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passion_jh

铜虫 (初入文坛)

将电压降低到120试试,跑的时间太久,marker跑出去了,当然少了一条了
5楼2012-11-27 11:11:02
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lizhijiang

木虫 (著名写手)

可以肯定marker降解了。
海上生明月,天涯共此时!
6楼2013-04-04 20:35:14
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