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月落星沉

银虫 (初入文坛)

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[求助] 求教一个关于SDS-PAGE电泳的问题（电泳条带的重影以及marker最后一条带跑不出来）

我的蛋白电泳中出现一些不该出现的条带，像重影一样。
在marker（中间的条带），和样品（2边的条带）中都有出现，比正常条带要细一些，淡一些。所以现在搞不清样品的2条带是拖尾了还是2种蛋白。这种现象要如何消除？
（我用的是3%的浓缩胶，10%的分离胶，上样量10μl，电泳开始时电压80V，然后调到160V，大约1h。）
另外，marker应该是6条带，但只跑出了5条带，最下面12KDa的带不见了，最下面出现的长长的，颜色略深的带到底是什么啊？

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1楼 2012-08-24 11:24:06

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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶

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【答案】应助回帖

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Marker一般是已知分子量的蛋白质，为了易得，一般是重组表达的，纯化后混合成商品。为了节省成本，一般不会纯化得太纯，有细微杂带是很正常的。

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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。

3楼2012-08-24 17:44:13

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gelois

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-24 21:45:12
月落星沉: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-08-26 09:33:37

先说你的Marker的问题。最后一条带没有，是因为你跑胶的时间太长了Marker跑出去了。至于胶上面最后一条长长的带，是你电泳之后染色染上去的，正好在你电泳结束的地方。一般跑胶都会有，不用在意。

看你的样品和Marker在中间部位都有杂带，但是Marker的下方就没有。感觉应该不像是胶的问题。不过如果你不放心可以重新配置一块胶，再跑一次，如果还是出现这样的情况，基本可以断定为那是你的样品不纯，那些细小的条带是杂带。至于Marker，很有可能被污染了，你可以点一个新Marker对比一下。

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2楼2012-08-24 14:51:01

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