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mancai0112

铜虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE电泳为什么浓缩胶没有起到浓缩的效果

今天  我跑的SDS-page电泳  ，SDS-PAGE电泳为什么浓缩胶没有起到浓缩的效果？
染色后浓缩胶上显示有条带 ，胶的配制按SDS-PAGE试剂盒  
求解决办法！  谢谢
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1楼 2013-09-12 12:46:22
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回帖置顶 ( 共有1个 )

ykluuniu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2013-09-14 02:04:18
gyesang: 回帖置顶 2013-09-14 02:04:20
引用回帖:
3楼: Originally posted by mancai0112 at 2013-09-13 13:35:32
浓缩胶3ml   
tris缓冲液的PH也 没问题   ，与同学讨论后，认为可能与电泳缓冲液有关或者与浓缩胶的浓度有关，今天又重跑的，电泳缓冲液新配制的PH8.3，还是与之前出现相同问题，上样后在胶上呈弥散状，如果减小 ...

1.浓缩胶3ml,但是你没说明你用的1.0还是1.5的板子？浓缩胶长一点没关系的。
2.浓缩胶就用5％。
3.tris-Hcl的PH非常重要，不能弄错，否则起不到浓缩作用。
4.电压多少？80-100V，跑30分钟，应该足够啦。
5.tris-甘氨酸缓冲液？应该不是问题吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-09-13 13:55:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-14 02:03:49
1. 浓缩胶的长度是否够？
2. 确定配浓缩胶的tris缓冲液的pH是6.8，不能用分离胶的tris。
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2楼2013-09-13 00:45:45
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mancai0112

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-13 00:45:45
1. 浓缩胶的长度是否够？
2. 确定配浓缩胶的tris缓冲液的pH是6.8，不能用分离胶的tris。

浓缩胶3ml   
tris缓冲液的PH也 没问题   ，与同学讨论后，认为可能与电泳缓冲液有关或者与浓缩胶的浓度有关，今天又重跑的，电泳缓冲液新配制的PH8.3，还是与之前出现相同问题，上样后在胶上呈弥散状，如果减小浓缩胶浓度可以吗？
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3楼2013-09-13 13:35:32
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-14 02:04:34
引用回帖:
3楼: Originally posted by mancai0112 at 2013-09-13 13:35:32
浓缩胶3ml   
tris缓冲液的PH也 没问题   ，与同学讨论后，认为可能与电泳缓冲液有关或者与浓缩胶的浓度有关，今天又重跑的，电泳缓冲液新配制的PH8.3，还是与之前出现相同问题，上样后在胶上呈弥散状，如果减小 ...

我问的是浓缩胶的长度。3ml的胶没有说板子多大，胶的厚度，无法判断。一般小胶的浓缩胶长度在6-8mm，大胶在1.5-2cm。
电泳缓冲液如果是tris-glycine体系，本身不用调pH，两种缓冲物质按照配方的比例就可以了。
浓缩胶的浓度一般在4-6%。浓度应该不是问题，只要配胶缓冲液的pH对，应该起到浓缩的效果。
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5楼2013-09-13 23:40:22
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mancai0112

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ykluuniu at 2013-09-13 13:55:02
1.浓缩胶3ml,但是你没说明你用的1.0还是1.5的板子？浓缩胶长一点没关系的。
2.浓缩胶就用5％。
3.tris-Hcl的PH非常重要，不能弄错，否则起不到浓缩作用。
4.电压多少？80-100V，跑30分钟，应该足够啦。
5.tris ...

我用的是 1.0 的板子  浓缩胶3ml、长度约为3cm左右
浓缩胶电压为80V  分离胶电压为120V
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6楼2013-09-14 16:38:46
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pligent

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-09-20 20:16:21
浓缩作用关键是浓缩胶区域要形成足够的电场强度，就要让你的浓缩胶里的甘氨酸解离程度要比缓冲液里氯离子解离程度小得多，所以浓缩胶和缓冲液PH确认调好应该是没有问题，不行的话，你可以试一下Tris--Tricine,Tris--硼酸
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betterthanbest
7楼2013-09-14 17:02:39
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