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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE制胶问题
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hepan1991

铁虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE制胶问题

最近SDS-PAGE实验后期染色脱色时，浓缩胶老是会脱离分离胶，以前实验做完了胶还是完整的，好好的，不知道是不是最近温度、湿度都增大的原因，要不要改变浓缩胶的配比浓度。。。。。。各位高手，指点一下。。。。。
    刚接触电泳实验，极度缺乏理论知识，大家有什么电泳基础知识方面，或是电泳分析方面的书籍也可以推荐下！谢谢！
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1楼 2013-06-13 10:42:21
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

生物小通

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖应助！ 2013-06-13 18:48:32
hepan1991: 金币+2, ★有帮助 2013-06-20 09:38:17
我都是直接把浓缩胶切掉不要，估计现在温度高，分离胶凝固的快又好，导致你加入浓缩胶是不能与分离胶再交叉形成网状结构了，从而形成了你的结果。
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学习，进步
2楼2013-06-13 10:53:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
hepan1991: 金币+2, ★有帮助 2013-06-20 09:38:30
引用回帖:
4楼: Originally posted by hepan1991 at 2013-06-13 11:05:40
我看到浓缩胶配方中10%AP和10%TEMED都是不等量加入，而且是T一般都只有AP的五分之一，甚至是十分之一，但是我们实验室配方都是AP和T等量的，请问，这两者的量是怎么确定的？？？...

TEMED是交联的底物，AP是催化剂，交联时提供自由基。AP和TEMED的量在不同的配方中有些不同，并没有特别的规定是多少，TEMED多时AP往往就少一些，总的来说是为了控制胶凝的速度，一般浓缩胶在20-30分钟凝好。
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5楼2013-06-14 07:19:49
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-06-14 06:21:39
hepan1991: 金币+1, ★有帮助 2013-06-20 09:38:41
一般都是不要浓缩胶的。除非你是想看看浓缩胶里是否有高分子蛋白才保留浓缩胶，否则直接去掉浓缩胶再染色脱色就可以了。
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3楼2013-06-13 11:03:25
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hepan1991

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 生物小通 at 2013-06-13 10:53:01
我都是直接把浓缩胶切掉不要，估计现在温度高，分离胶凝固的快又好，导致你加入浓缩胶是不能与分离胶再交叉形成网状结构了，从而形成了你的结果。

我看到浓缩胶配方中10%AP和10%TEMED都是不等量加入，而且是T一般都只有AP的五分之一，甚至是十分之一，但是我们实验室配方都是AP和T等量的，请问，这两者的量是怎么确定的？？？
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4楼2013-06-13 11:05:40
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生物小通

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by hepan1991 at 2013-06-13 11:05:40
我看到浓缩胶配方中10%AP和10%TEMED都是不等量加入，而且是T一般都只有AP的五分之一，甚至是十分之一，但是我们实验室配方都是AP和T等量的，请问，这两者的量是怎么确定的？？？...

我们都是按照碧云天提供的配方配置的，怎么确定不清楚。T挥发，又有毒性，所以少用为好。
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学习，进步
6楼2013-06-14 14:46:06
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zhaoxr0311

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 鼓励新虫发帖 2013-06-15 03:12:28
现在天气热，凝的比较快，建议凝时间长些再用。
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7楼2013-06-14 15:12:57
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zrbgm

新虫 (初入文坛)
尽量轻柔不要有气泡
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8楼2013-06-26 09:55:53
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明年明月

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hepan1991 at 2013-06-13 11:05:40
我看到浓缩胶配方中10%AP和10%TEMED都是不等量加入，而且是T一般都只有AP的五分之一，甚至是十分之一，但是我们实验室配方都是AP和T等量的，请问，这两者的量是怎么确定的？？？...

TEMED的量太大了吧！
我们一般12ml的最终配置的胶混合液加100ul的AP和7ul的TEMED

TEMED加的量比较少的，也很快凝固。
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追曦——相信未来
9楼2013-12-03 13:55:35
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LEMON 0202

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 生物小通 at 2013-06-14 14:46:06
我们都是按照碧云天提供的配方配置的，怎么确定不清楚。T挥发，又有毒性，所以少用为好。...

碧云天提供的配方可不可以给我发一份
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10楼2016-02-16 19:53:08
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