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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-page　分离胶不凝固
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twisty

木虫 (正式写手)

newer

[求助] SDS-page　分离胶不凝固

12.5%分离胶配制为：Ａ：4.17mL
                                  B:   2.5mL
                                 H2O:3.3mL
                                AP:50微升
　　　　　　　　　TEMED:10微升
按比例加入电泳槽后，只有近50%凝固了，这是为什么？
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1楼2011-08-11 09:10:35
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): AP杯具概率大~~ 2011-08-11 10:41:18
先检查APS                                                    。
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2楼2011-08-11 09:26:54
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mirror3895

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
adslye(金币+1): 这是个化学反应，温度是会有影响，但主要还是试剂过期情况多点。感谢交流~ 2011-08-11 10:42:48
放在温度高一点的地方啊，据说这个胶凝固的速度和温度及氧气有关，氧气会抑制它凝固的
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3楼2011-08-11 09:54:12
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imfly77

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 结合前面的AP，现在全了~祝顺利！ 2011-08-11 10:41:47
可能的原因是过硫酸铵或TEMED失效。
建议重新配一下过硫酸铵。
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4楼2011-08-11 09:56:12
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yuandian114

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流，欢迎常来 2011-08-11 13:23:26
twisty(金币+2): 过硫酸铵我配好后一直放在四度冰箱里了，也许是它的原因，真是感谢你了！ 2011-08-11 14:23:32
1.可适当增加过硫酸铵和TEMED的用量
2.我配12.5%的胶是A：7.5ml   B：4.5 ml   水：6ml。过硫酸铵40ul  TEMED 10ul（我通常会多加，如过硫酸铵加80ul，TEMED加15ul）             配一面胶用量减半。
3.过硫酸铵要现配现用，lz是不是之前配的呢
4.冬天温度低时，我会放在37度培养箱里，凝得比较快。
祝顺利
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5楼2011-08-11 11:17:47
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imfly77

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yuandian114 at 2011-08-11 11:17:47:
1.可适当增加过硫酸铵和TEMED的用量
2.我配12.5%的胶是A：7.5ml   B：4.5 ml   水：6ml。过硫酸铵40ul  TEMED 10ul（我通常会多加，如过硫酸铵加80ul，TEMED加15ul）             配一面胶用量减半。
3.过硫酸铵 ...

过硫酸铵也不是必须先配现用。一次配10ml左右，用完拧紧放冰箱，一般能用几个月。但如果过硫酸铵出问题就会导致胶凝不了，以前我们实验室有一段时间就老出这问题，后来重新配了过硫酸铵就好了。
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6楼2011-08-11 11:42:16
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yuandian114

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by yuandian114 at 2011-08-11 11:17:47:
1.可适当增加过硫酸铵和TEMED的用量
2.我配12.5%的胶是A：7.5ml   B：4.5 ml   水：6ml。过硫酸铵40ul  TEMED 10ul（我通常会多加，如过硫酸铵加80ul，TEMED加15ul）             配一面胶用量减半。
3.过硫酸铵 ...

这样啊，谢谢哦，在保证过硫酸铵没出现问题的情况下这样会方便些，小女都是根据师兄师姐的经验现配现用的，一般0.1g加200ul的蒸馏水，虽然麻烦点但一般可排除过硫酸的问题。谢谢大侠哈，偶长见识了。
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7楼2011-08-11 12:00:34
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-08-11 20:42:59
APS固体是放在4度的，但配成液体之后我们就放在-20度。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜素论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2011-08-11 20:19:00
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落满夏天

银虫 (正式写手)
这种情况一般一下几个可能;
1.胶没有混匀。2.温度太低。3.过硫酸铵或是四甲基乙二胺过期。
我认为1的可能性最大。
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星星之火，可以燎原
9楼2011-08-12 10:45:22
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落满夏天

银虫 (正式写手)
这种情况一般一下几个可能;
1.胶没有混匀。2.温度太低。3.过硫酸铵或是四甲基乙二胺过期。
我认为1的可能性最大。
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星星之火，可以燎原
10楼2011-08-12 10:45:41
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