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mancai0112

铜虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE电泳为什么浓缩胶没有起到浓缩的效果

今天  我跑的SDS-page电泳  ,SDS-PAGE电泳为什么浓缩胶没有起到浓缩的效果?
染色后浓缩胶上显示有条带 ,胶的配制按SDS-PAGE试剂盒  
求解决办法!  谢谢
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-14 02:04:34
引用回帖:
3楼: Originally posted by mancai0112 at 2013-09-13 13:35:32
浓缩胶3ml   
tris缓冲液的PH也 没问题   ,与同学讨论后,认为可能与电泳缓冲液有关或者与浓缩胶的浓度有关,今天又重跑的,电泳缓冲液新配制的PH8.3,还是与之前出现相同问题,上样后在胶上呈弥散状,如果减小 ...

我问的是浓缩胶的长度。3ml的胶没有说板子多大,胶的厚度,无法判断。一般小胶的浓缩胶长度在6-8mm,大胶在1.5-2cm。
电泳缓冲液如果是tris-glycine体系,本身不用调pH,两种缓冲物质按照配方的比例就可以了。
浓缩胶的浓度一般在4-6%。浓度应该不是问题,只要配胶缓冲液的pH对,应该起到浓缩的效果。
5楼2013-09-13 23:40:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-14 02:03:49
1. 浓缩胶的长度是否够?
2. 确定配浓缩胶的tris缓冲液的pH是6.8,不能用分离胶的tris。
2楼2013-09-13 00:45:45
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mancai0112

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-13 00:45:45
1. 浓缩胶的长度是否够?
2. 确定配浓缩胶的tris缓冲液的pH是6.8,不能用分离胶的tris。

浓缩胶3ml   
tris缓冲液的PH也 没问题   ,与同学讨论后,认为可能与电泳缓冲液有关或者与浓缩胶的浓度有关,今天又重跑的,电泳缓冲液新配制的PH8.3,还是与之前出现相同问题,上样后在胶上呈弥散状,如果减小浓缩胶浓度可以吗?
3楼2013-09-13 13:35:32
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ykluuniu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2013-09-14 02:04:18
gyesang: 回帖置顶 2013-09-14 02:04:20
引用回帖:
3楼: Originally posted by mancai0112 at 2013-09-13 13:35:32
浓缩胶3ml   
tris缓冲液的PH也 没问题   ,与同学讨论后,认为可能与电泳缓冲液有关或者与浓缩胶的浓度有关,今天又重跑的,电泳缓冲液新配制的PH8.3,还是与之前出现相同问题,上样后在胶上呈弥散状,如果减小 ...

1.浓缩胶3ml,但是你没说明你用的1.0还是1.5的板子?浓缩胶长一点没关系的。
2.浓缩胶就用5%。
3.tris-Hcl的PH非常重要,不能弄错,否则起不到浓缩作用。
4.电压多少?80-100V,跑30分钟,应该足够啦。
5.tris-甘氨酸缓冲液?应该不是问题吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-09-13 13:55:02
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