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mancai0112

铜虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE电泳为什么浓缩胶没有起到浓缩的效果

今天  我跑的SDS-page电泳  ，SDS-PAGE电泳为什么浓缩胶没有起到浓缩的效果？
染色后浓缩胶上显示有条带 ，胶的配制按SDS-PAGE试剂盒  
求解决办法！  谢谢
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1楼 2013-09-12 12:46:22
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ykluuniu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2013-09-14 02:04:18
gyesang: 回帖置顶 2013-09-14 02:04:20
引用回帖:
3楼: Originally posted by mancai0112 at 2013-09-13 13:35:32
浓缩胶3ml   
tris缓冲液的PH也 没问题   ，与同学讨论后，认为可能与电泳缓冲液有关或者与浓缩胶的浓度有关，今天又重跑的，电泳缓冲液新配制的PH8.3，还是与之前出现相同问题，上样后在胶上呈弥散状，如果减小 ...

1.浓缩胶3ml,但是你没说明你用的1.0还是1.5的板子？浓缩胶长一点没关系的。
2.浓缩胶就用5％。
3.tris-Hcl的PH非常重要，不能弄错，否则起不到浓缩作用。
4.电压多少？80-100V，跑30分钟，应该足够啦。
5.tris-甘氨酸缓冲液？应该不是问题吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-09-13 13:55:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-14 02:03:49
1. 浓缩胶的长度是否够？
2. 确定配浓缩胶的tris缓冲液的pH是6.8，不能用分离胶的tris。
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2楼2013-09-13 00:45:45
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mancai0112

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-13 00:45:45
1. 浓缩胶的长度是否够？
2. 确定配浓缩胶的tris缓冲液的pH是6.8，不能用分离胶的tris。

浓缩胶3ml   
tris缓冲液的PH也 没问题   ，与同学讨论后，认为可能与电泳缓冲液有关或者与浓缩胶的浓度有关，今天又重跑的，电泳缓冲液新配制的PH8.3，还是与之前出现相同问题，上样后在胶上呈弥散状，如果减小浓缩胶浓度可以吗？
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3楼2013-09-13 13:35:32
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-14 02:04:34
引用回帖:
3楼: Originally posted by mancai0112 at 2013-09-13 13:35:32
浓缩胶3ml   
tris缓冲液的PH也 没问题   ，与同学讨论后，认为可能与电泳缓冲液有关或者与浓缩胶的浓度有关，今天又重跑的，电泳缓冲液新配制的PH8.3，还是与之前出现相同问题，上样后在胶上呈弥散状，如果减小 ...

我问的是浓缩胶的长度。3ml的胶没有说板子多大，胶的厚度，无法判断。一般小胶的浓缩胶长度在6-8mm，大胶在1.5-2cm。
电泳缓冲液如果是tris-glycine体系，本身不用调pH，两种缓冲物质按照配方的比例就可以了。
浓缩胶的浓度一般在4-6%。浓度应该不是问题，只要配胶缓冲液的pH对，应该起到浓缩的效果。
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5楼2013-09-13 23:40:22
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