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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Tricine-sds-page电泳要怎么跑？帮我分析一下结果啊。
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

[求助] Tricine-sds-page电泳要怎么跑？帮我分析一下结果啊。

我用的是nature 的protocol，但是为什么每次跑出来，小分子仍然分不开呢？10KD以下都没有条带。
我用的是16%T、3%C的胶，加或不加尿素我都试过。都一样，10KD以下跑不出条带来。是什么原因？
注：最小的那个黄色marker是10KD。

130111 Tricine-SDS-PAGE电泳（无尿素）.JPG
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1楼 2013-01-19 12:55:45
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
snoopyzxx: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-19 15:33:15
16%的胶分几kD的蛋白应该是很漂亮的。首先胶本身可能有问题，你的marker也不是很漂亮。你确定制胶的缓冲液和丙烯酰胺没有问题吗？样品可能没有处理好，有纵向条纹和拖尾，上样前是否离心。上样量可能有些大了，样品上了多少μg蛋白？此外，你的样品中小分子量的蛋白是否丰度比较低？
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2楼2013-01-19 13:59:05
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-19 13:59:05
16%的胶分几kD的蛋白应该是很漂亮的。首先胶本身可能有问题，你的marker也不是很漂亮。你确定制胶的缓冲液和丙烯酰胺没有问题吗？样品可能没有处理好，有纵向条纹和拖尾，上样前是否离心。上样量可能有些大了，样品 ...

我跑的是E.coli诱导表达的上清和沉淀。按道理，应该有很多小分子条带啊。
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3楼2013-01-19 15:33:55
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopyzxx at 2013-01-19 15:33:55
我跑的是E.coli诱导表达的上清和沉淀。按道理，应该有很多小分子条带啊。...

只是看看带型分布不必用tris-tricine胶吧。如果目的蛋白分子量小自然另当别论。
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4楼2013-01-19 18:22:33
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-19 18:22:33
只是看看带型分布不必用tris-tricine胶吧。如果目的蛋白分子量小自然另当别论。...

我的目的蛋白只有6KD，所以才用Tricine 的。
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5楼2013-01-19 18:24:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
snoopyzxx: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-19 19:27:39
引用回帖:
5楼: Originally posted by snoopyzxx at 2013-01-19 18:24:26
我的目的蛋白只有6KD，所以才用Tricine 的。...

如果你是在大肠杆菌里诱导表达的话，应该可以诱导出明显的带，不用tricine胶也应该能看到。我觉得你目前正在检测诱导条件，直接上普通的16%胶就可以了。注意不要把前沿跑出去了。当然，Tricine胶的确是分离效果好。只是这样也不知道你的胶的问题在哪里。我觉得是不是有溶液配得不对，检查一下3×gel buffer的pH是否调得正确。Tris加浓盐酸会产热，先调到大概，然后等溶液冷却后再继续调至所需pH。还有就是丙烯酰胺溶液中的丙烯酰胺：甲叉丙烯酰胺比例。我是配成48:15%的stock。
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6楼2013-01-19 18:51:47
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Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
snoopyzxx: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-20 09:54:15
第一蛋白的量太大，可少加些样品或稀释一下；第二蛋白比较杂；第三胶没配好，marker都没跑好。
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Followyourheart!
7楼2013-01-20 00:07:47
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