应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Tricine-sds-page电泳要怎么跑？帮我分析一下结果啊。
71/1返回列表
查看: 2712  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

snoopyzxx

木虫 (著名写手)

[求助] Tricine-sds-page电泳要怎么跑？帮我分析一下结果啊。

我用的是nature 的protocol，但是为什么每次跑出来，小分子仍然分不开呢？10KD以下都没有条带。
我用的是16%T、3%C的胶，加或不加尿素我都试过。都一样，10KD以下跑不出条带来。是什么原因？
注：最小的那个黄色marker是10KD。

130111 Tricine-SDS-PAGE电泳（无尿素）.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
生物资源交流QQ群：1044518333
1楼 2013-01-19 12:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
snoopyzxx: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-19 15:33:15
16%的胶分几kD的蛋白应该是很漂亮的。首先胶本身可能有问题，你的marker也不是很漂亮。你确定制胶的缓冲液和丙烯酰胺没有问题吗？样品可能没有处理好，有纵向条纹和拖尾，上样前是否离心。上样量可能有些大了，样品上了多少μg蛋白？此外，你的样品中小分子量的蛋白是否丰度比较低？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-01-19 13:59:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-19 13:59:05
16%的胶分几kD的蛋白应该是很漂亮的。首先胶本身可能有问题，你的marker也不是很漂亮。你确定制胶的缓冲液和丙烯酰胺没有问题吗？样品可能没有处理好，有纵向条纹和拖尾，上样前是否离心。上样量可能有些大了，样品 ...

我跑的是E.coli诱导表达的上清和沉淀。按道理，应该有很多小分子条带啊。
赞一下 回复此楼
生物资源交流QQ群：1044518333
3楼2013-01-19 15:33:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopyzxx at 2013-01-19 15:33:55
我跑的是E.coli诱导表达的上清和沉淀。按道理，应该有很多小分子条带啊。...

只是看看带型分布不必用tris-tricine胶吧。如果目的蛋白分子量小自然另当别论。
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-19 18:22:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-19 18:22:33
只是看看带型分布不必用tris-tricine胶吧。如果目的蛋白分子量小自然另当别论。...

我的目的蛋白只有6KD，所以才用Tricine 的。
赞一下 回复此楼
生物资源交流QQ群：1044518333
5楼2013-01-19 18:24:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
snoopyzxx: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-19 19:27:39
引用回帖:
5楼: Originally posted by snoopyzxx at 2013-01-19 18:24:26
我的目的蛋白只有6KD，所以才用Tricine 的。...

如果你是在大肠杆菌里诱导表达的话，应该可以诱导出明显的带，不用tricine胶也应该能看到。我觉得你目前正在检测诱导条件，直接上普通的16%胶就可以了。注意不要把前沿跑出去了。当然，Tricine胶的确是分离效果好。只是这样也不知道你的胶的问题在哪里。我觉得是不是有溶液配得不对，检查一下3×gel buffer的pH是否调得正确。Tris加浓盐酸会产热，先调到大概，然后等溶液冷却后再继续调至所需pH。还有就是丙烯酰胺溶液中的丙烯酰胺：甲叉丙烯酰胺比例。我是配成48:15%的stock。
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-19 18:51:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
snoopyzxx: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-20 09:54:15
第一蛋白的量太大，可少加些样品或稀释一下；第二蛋白比较杂；第三胶没配好，marker都没跑好。
赞一下 回复此楼
Followyourheart!
7楼2013-01-20 00:07:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 snoopyzxx 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭