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Tricine-sds-page电泳要怎么跑?帮我分析一下结果啊。
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snoopyzxx
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Tricine-sds-page电泳要怎么跑?帮我分析一下结果啊。
我用的是nature 的protocol,但是为什么每次跑出来,小分子仍然分不开呢?10KD以下都没有条带。
我用的是16%T、3%C的胶,加或不加尿素我都试过。都一样,10KD以下跑不出条带来。是什么原因?
注:最小的那个黄色marker是10KD。
130111 Tricine-SDS-PAGE电泳(无尿素).JPG
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2013-01-19 12:55:45
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2楼
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Originally posted by
cicelyzh
at 2013-01-19 13:59:05
16%的胶分几kD的蛋白应该是很漂亮的。首先胶本身可能有问题,你的marker也不是很漂亮。你确定制胶的缓冲液和丙烯酰胺没有问题吗?样品可能没有处理好,有纵向条纹和拖尾,上样前是否离心。上样量可能有些大了,样品 ...
我跑的是E.coli诱导表达的上清和沉淀。按道理,应该有很多小分子条带啊。
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2013-01-19 15:33:15
16%的胶分几kD的蛋白应该是很漂亮的。首先胶本身可能有问题,你的marker也不是很漂亮。你确定制胶的缓冲液和丙烯酰胺没有问题吗?样品可能没有处理好,有纵向条纹和拖尾,上样前是否离心。上样量可能有些大了,样品上了多少μg蛋白?此外,你的样品中小分子量的蛋白是否丰度比较低?
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2楼
2013-01-19 13:59:05
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3楼
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Originally posted by
snoopyzxx
at 2013-01-19 15:33:55
我跑的是E.coli诱导表达的上清和沉淀。按道理,应该有很多小分子条带啊。...
只是看看带型分布不必用tris-tricine胶吧。如果目的蛋白分子量小自然另当别论。
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4楼
2013-01-19 18:22:33
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Originally posted by
cicelyzh
at 2013-01-19 18:22:33
只是看看带型分布不必用tris-tricine胶吧。如果目的蛋白分子量小自然另当别论。...
我的目的蛋白只有6KD,所以才用Tricine 的。
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5楼
2013-01-19 18:24:26
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