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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白SDS-PAGE 下面 老是跑不出来，请各位前辈帮我看看
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msms

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白SDS-PAGE 下面 老是跑不出来，请各位前辈帮我看看 已有4人参与

最下面的条带有点弥散，最郁闷的是最下面有一条长长的横线，不知道是什么，貌似还有条带在里面，分不出来，请各位前辈帮我看看，能怎么解决，我都急死了。
蛋白SDS-PAGE 下面 老是跑不出来，请各位前辈帮我看看
wy2013-11-27 20hr 07min_副本.jpg
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1楼 2013-12-02 10:30:38
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-08 20:40:17
SDS-PAGE下面本来分辨率就会变差，你的胶算不错的了。你说的最下面的线应该是指示剂前沿，有小蛋白在那附近也正常。如果你想提高小蛋白的分辨率，可以用高浓度的胶或者跑梯度胶。实在不行可以跑Tricine胶。
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3楼2013-12-03 02:20:16
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-08 20:40:24
我们实验室一般用5%的浓缩胶，12%的分离胶。不知你用的是不是，可以试试看。
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4楼2013-12-03 08:58:24
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-08 20:39:52
最下面的黑带是溴酚蓝没有跑过的胶染出来的条带，或者是溴酚蓝的条带区域染色的条带，不知道你用什么染色的，我用的一种武汉麦克莱博生物公司的快染试剂背景较浅，基本上可以消下面的那条黑线
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6楼2013-12-03 09:57:53
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shen_41745

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

另外，你要对一下Marker，确定一下目的蛋白的大小，如果蛋白小于20KD,就要把蛋白分离胶的浓度加大至20%以上
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22楼2013-12-11 19:56:04
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rice1007

禁虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 20:16:20
本帖内容被屏蔽
23楼2013-12-12 10:57:46
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普通回帖

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-02 16:33:19
这算是跑的挺清楚的了，解决方法：1.加大分离胶浓度；2.减少电泳时间；不知道你的目的产物有多大，通常不会看到那么小的片段吧。就图上看倒数第二个样本与其他样本有较明显区别。
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金币是赌出来的
2楼2013-12-02 16:23:23
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lm2570

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-08 20:40:35
从图上看，从右到左第三泳道有一小蛋白带，是其它泳道没有的，可以做一个westernblot看看
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5楼2013-12-03 09:13:00
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shen_41745

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我说楼主，你跑这蛋白胶的目的是什么啊？实验目的都不明确，怎么看啊？
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7楼2013-12-03 20:37:19
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makubex83

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-08 20:40:45
我也有过你这样的情况，别的都很好，就是在最下面有一条那样的条带，怎么脱色都脱不下去。 我也一直没哟好的办法，但是很奇怪的是，这个效果时有时没有，你看看从新弄个上扬缓冲液，和分离胶的试剂从新配一下。
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8楼2013-12-04 15:52:32
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msms

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wjswj at 2013-12-02 16:23:23
这算是跑的挺清楚的了，解决方法：1.加大分离胶浓度；2.减少电泳时间；不知道你的目的产物有多大，通常不会看到那么小的片段吧。就图上看倒数第二个样本与其他样本有较明显区别。

因为跑的是水稻全蛋白，最下面的条带是第二大含量的存储蛋白，所以还是蛮重要的，不知道为什么，老是跟那个长长的线分不开
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9楼2013-12-05 10:25:25
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msms

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-03 02:20:16
SDS-PAGE下面本来分辨率就会变差，你的胶算不错的了。你说的最下面的线应该是指示剂前沿，有小蛋白在那附近也正常。如果你想提高小蛋白的分辨率，可以用高浓度的胶或者跑梯度胶。实在不行可以跑Tricine胶。

嗯，我也打算用tricine试试，谢谢啦
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10楼2013-12-05 10:26:15
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