24小时热门版块排行榜

南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知

返回列表

valleybeau

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 42
帖子: 16
在线: 13.9小时
虫号: 774279
注册: 2009-05-19
专业: 蛋白质组学

[求助] sds-page 凝胶电泳求助只有marker条带是清晰的，但宽窄不一已有9人参与

浓缩胶5%，电压80V,分离胶10% 电压160V，跑胶结果很不理想，marker 条带越跑越窄，样品条带越跑越宽，且不清晰，到底是什么原因，还请大家指点迷津。

sds-page.jpg

回复此楼

1楼2014-05-11 21:29:49

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

tujuo

金虫 (正式写手)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 2185.8
散金: 100
帖子: 311
在线: 230.1小时
虫号: 1116491
注册: 2010-10-08
性别: GG
专业: 生物力学与生物流变学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
valleybeau: 金币+3, ★有帮助, 每孔上样就没有条带宽窄不一的情况其实是上样浓度太低导致条带模糊 2014-06-11 21:08:25
valleybeau: 金币+2 2014-10-16 11:16:20

你可以在空白孔和markrr孔补适量的上样缓冲液。而且你的蛋白提的也不太好，看起来条带分不开。

[ 发自小木虫客户端 ]

赞一下(1人)

回复此楼

如果能让自己不在等待中苍老，又何尝不想活得洒脱。。。

11楼2014-05-15 13:53:24

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

专家经验: +218
BioEPI: 11
应助: 397 (硕士)
贵宾: 0.044
金币: 2118.9
散金: 10
红花: 208
帖子: 5633
在线: 571.6小时
虫号: 1766465
注册: 2012-04-19
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能
管辖: 生物科学综合

【答案】应助回帖

SDS电泳带变宽的原因和改进措施(2013-10-7)

在下写的，参考一下了

1.原因一：上样量过多，应该减少上样量。对策：加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15μL（即2-10μg蛋白质）。如果样品很稀上样量可以达到100μL。
2.原因二：样品溶解不完全。
对策：
（1）样品应该充分溶解：保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解，上样前最好离心一下，实在溶解不掉的颗粒就去掉。
(2)可以根据分子量标准的蛋白质试剂盒的要求加入样品溶解液；如果是自行配置标准和未知样品，按照0.5-1.0mg/L样品溶解液。溶解后，将其转移至Eppendorf管，盖上盖子（可以在盖子处加上卡子）后在110度沸水中水浴加热3分钟（可以在薄泡沫塑料板上钻出几个与Eppendorf管直径形同的圆洞，Eppendorf管放下去直到盖子边缘约束不能再往下为止，把薄泡沫塑料板的暴露出Eppendorf管的管体大部分的那一面放入沸水浴锅中，薄泡沫塑料板自然飘在沸水表面，便于取用和加热，也可避免沸水溅起。可以一批对于多个Eppendorf管进行不同时间的沸水浴。不要把Eppendorf管扔进沸水浴锅中，盖子可能会被冲开），而后在室温下冷却待用。如果较长时间不用，则将样品放入零下20度冰箱中储存，需用时在取出后使用前在110度沸水中加热3分钟室温冷却后再上样，以去掉样品蛋白质中的亚稳态聚合体。
（3）改变样品缓冲溶液使得样品能够充分溶解，SDS 用量要充分。
原因三：SDS电泳带与邻近蛋白质电泳相连。除了上样量过多和样品溶解不完全外，凝胶的加样孔泄露会使得电泳带变宽。加样孔泄露往往由于凝胶与玻璃板之间产生裂纹引起。对策：此时只能重新制备凝胶，梳子拔起时要小心等凝胶凝聚完毕，速度不宜过快，拔起的方向要垂直于凝胶表面；要避免凝胶两侧的玻璃板与凝胶之间产生裂纹，在凝胶制备过程中不要挤压凝胶两侧的玻璃板。

赞一下(1人)

回复此楼

16楼2014-07-07 23:46:17

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖