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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 为何SDS-PAGE胶Marker很清晰，而其他带颜色均较浅？
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@木笔@

木虫 (小有名气)

[求助] 为何SDS-PAGE胶Marker很清晰，而其他带颜色均较浅？ 已有2人参与

请问，各位，我的SDS-PAGE胶这两天跑的时候Marker很清晰，而其他带颜色均较浅，以至于都没有办法分清楚目的蛋白的条带了，请问各位有好的建议么？多谢了
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做最好的自己！
1楼 2014-03-28 21:44:20
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回帖置顶 ( 共有1个 )

d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 谢谢参与 2014-04-01 16:35:01
不知道你是直接染胶还是做western，如果是直接染胶的话可能是蛋白上样量太低，多上点试试
如果是做western的话，出现这种情况有以下几种原因：
1. 蛋白上样量不够，导致一抗二抗结合的少。
2. 一抗特异性不强，结合不了目的蛋白，你所看到的带都是杂带。我曾经出现过这种情况，针对一种蛋白有很多公司都有相应的抗体，这些抗体的特异性不一样，我有次试HA-tag的抗体试了4个公司的，最后才找到一个非常好的抗体，最后就一直沿用。可以换抗体试试。
3. 你的抗体稀释倍数过高，导致没有结合。或者封闭时间太长。
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2楼2014-03-28 22:38:46
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普通回帖

@木笔@

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-28 22:38:46
不知道你是直接染胶还是做western，如果是直接染胶的话可能是蛋白上样量太低，多上点试试
如果是做western的话，出现这种情况有以下几种原因：
1. 蛋白上样量不够，导致一抗二抗结合的少。
2. 一抗特异性不强，结 ...

我是用考马斯亮蓝直接染色的。上样量以前也是那么多条带还是可以分得清楚的，所以我在想是不是染色液出问题了，昨天重新配置了。等结果出来了再看吧
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做最好的自己！
3楼2014-03-29 20:58:07
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jiangxincsu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2014-04-01 16:35:31
我觉得染色液的问题不大，因为mark可以看的清楚，估计是上样量的问题
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4楼2014-04-01 13:45:00
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@木笔@

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jiangxincsu at 2014-04-01 13:45:00
我觉得染色液的问题不大，因为mark可以看的清楚，估计是上样量的问题

请问你们是稳流还是稳压跑的呀？
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做最好的自己！
5楼2014-04-01 14:15:26
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jiangxincsu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by @木笔@ at 2014-04-01 14:15:26
请问你们是稳流还是稳压跑的呀？...

我们一般稳压，蛋白是100V左右，菌液一般开始100V之后220V左右，视情况定
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6楼2014-04-03 19:01:55
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Reiki

铁虫 (初入文坛)
同样遇到此问题，请问解决了吗？
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7楼2021-05-19 23:31:46
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