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dfm1987

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE 银染 marker晕染到其他泳道

SDS-PAGE蛋白电泳，银染法检测条带。染色后MAKER条带很深，造成周围的条带都有MARKER的印记。做实验时因为时间关系，将胶用保鲜膜包了放在冰箱中，第二天才染色，不知道是不是因为这个原因？如果不是，怎样解决这样的问题？各位大侠帮帮忙！（MARKER上样量2微升，加样时也注意看了没有逸散到其他泳道）
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1楼 2013-09-20 22:39:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-21 02:02:16
dfm1987: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-09-21 21:26:59
跑完胶应立即放入固定液中。没时间染可以固定过夜。蛋白不比核酸，直接放会造成严重扩散，尤其是分子量小的区域。银染的灵敏度比考染高，你说的2μlmarker对应于每条带是多少蛋白？
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2楼2013-09-20 23:28:49
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dfm1987

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-20 23:28:49
跑完胶应立即放入固定液中。没时间染可以固定过夜。蛋白不比核酸，直接放会造成严重扩散，尤其是分子量小的区域。银染的灵敏度比考染高，你说的2μlmarker对应于每条带是多少蛋白？

染色后MARKER条带很深，每条带对应多少蛋白没查到，从结果上看，条带深的蛋白扩散比较严重。可能确实是没有及时进行固定染色的原因，因为及时银染的不太容易出现这样的情况。谢谢！
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3楼2013-09-21 21:26:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dfm1987 at 2013-09-21 21:26:34
染色后MARKER条带很深，每条带对应多少蛋白没查到，从结果上看，条带深的蛋白扩散比较严重。可能确实是没有及时进行固定染色的原因，因为及时银染的不太容易出现这样的情况。谢谢！...

marker条带很深可以适当减少用量。祝好运。
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4楼2013-09-22 01:43:39
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gao809

木虫 (小有名气)
银染的灵敏很高，可以减少上样量。
胶不应该放冰箱，可以放固定液里过夜，第二天再染。冰箱里放了一夜，条带容易弥散。
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5楼2013-09-23 21:20:13
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