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934026718

新虫 (初入文坛)

[求助] 最奇怪的 Tricine SDS PAGE 怎么会成这样子?样品完全看不出 marker还行

Tricine-SDS-Page凝胶电泳储存液的配制如下:
Anode Buffer  (5x):        1 M Tris-Cl   pH = 8.9
Cathode Buffer(5x):         0.5M Tris, 0.5M Tricine Buffer     0.5% SDS, Ph8.25
Gel Buffer    (3x):        3M Tris-Cl, 0.3% SDS, pH=8.45
Glycerol :                  50%
GelSolution(49.5%T,6%C): 46.5g acrlamide,3,N’-Methylene bisacrylamide   add water to 100 ml   
loading buffer:150µl1mol/L pH6.8的Tris-HCl,300ul 甘油,0.12gSDS,0.0005g考马斯亮蓝G250,550ul水

Tricine-SDS-Page凝胶电泳浓缩胶及分离胶的配制如下:
Separating Gel (16.5%)
Gel solution: 3 ml
Gel Buffer  : 3 ml
50% Glycerol: 3 ml
10% AP      : 100 ul
TEMED       : 10 ul


Stacking Gel  ( 4% )
Gel solution: 0.5 ml
Gel Buffer  : 2.1 ml
Water       : 3.6 ml
10% AP      : 70 ul
TEMED        : 8 ul


我的电泳跑了好几次都是这样 完全不知道为什么 溶液都是新配的 应该不存在过期和PH不准确等问题 marker右边四个是样品
问题:1 marker为什么会有波浪不稳?
      2 样品怎么会和开了花似的?

希望各位大神解救我啊!!





[ Last edited by 934026718 on 2012-7-12 at 15:31 ]
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lingpiao

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-12 21:53:43
PAGE胶的问题,建议你重新配母液,一定注意pH的准确;另外上样孔一定要整齐
2楼2012-07-12 16:27:48
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934026718

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lingpiao at 2012-07-12 16:27:48
PAGE胶的问题,建议你重新配母液,一定注意pH的准确;另外上样孔一定要整齐

我是配的49.5%T,6%c的浓度,用的23.25g丙烯酰胺+1.5g甲叉,定容50ml,这样有什么问题吗?
3楼2012-07-13 08:40:28
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lingpiao

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

多半要把pH调整一下,我以前跑普通SDSPAGE也出过这样的图,后来发现就是pH的问题
4楼2012-07-13 09:02:20
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
Marker貌似也不行,只是勉强看得清。这种情况其实也常见。多是缓冲液pH的问题,母液重新配一下吧。
5楼2012-07-13 09:08:39
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934026718

新虫 (初入文坛)

今天把所有缓冲液的PH全部调整了一遍 还是不行啊
6楼2012-07-13 17:58:44
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murphyLW

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 934026718 at 2012-07-13 17:58:44
今天把所有缓冲液的PH全部调整了一遍 还是不行啊

电压调小点试试看
7楼2012-07-13 19:42:59
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skuy1223

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人感觉是不是因为胶没有完全凝固的原因呢?另一个原因可能是因为浓缩胶太短了。
努力!
8楼2012-07-13 22:18:04
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的Marker跑的比蛋白样品好一点,可能是你的样品中Loading的含量低,建议多加点Loading;然后胶跑成这个样子可能是胶没凝好,或者你的胶板是密封不太紧,有点漏胶,导致电压分布不均匀
9楼2012-07-15 12:18:29
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