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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 含蛋白质的样品，进C18柱，会对柱子产生什么影响呢？
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xiaoyan1028

木虫 (正式写手)

[求助] 含蛋白质的样品，进C18柱，会对柱子产生什么影响呢？

如题，最近在做大豆中活性成分提取。蛋白质含量很高。样品过0.45微米的滤膜一个小时以后，会在瓶底出现沉淀，怀疑是蛋白质。沉淀后，经过二次过滤的话会好些。想问下大家，我第一次过滤完后直接进样，会不会对柱子产生影响？主要是什么影响呢？我流动相为乙腈，水（pH=3）。
看论坛上说，蛋白会堵塞柱子，我这个已经过了0.45微米的滤膜了，会不会沉淀在柱子上呢？看文献的话，大多数人都是没有经过脱蛋白处理的呢。
谢谢大家
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1楼 2012-07-04 09:33:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助，欢迎常来交流 2012-07-04 10:34:41
xiaoyan1028: 金币+2, 谢谢帮忙 2012-07-04 12:19:59
生物样品，柱子的寿命一般都不长。柱子孔径越小，越容污染。建议改用0.22um或0.2um的微孔滤膜。每次实验完成，及时清理。
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守候在风中的宁静。
2楼2012-07-04 10:31:21
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaoyan1028 at 2012-07-04 12:21:46
恩，做完倒是及时清洗了。不过看文献，很多都是用0.45um的滤膜，做实验的时候觉得也还好。我比较过0.22和0.45的膜，感觉没什么差别。不知道对柱子来说，会不会有区别。...

在保护色谱柱方面，当然是0.22um的较好了，做这些样品，最好还能使用在线过滤器和保护柱。
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守候在风中的宁静。
6楼2012-07-04 12:27:03
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普通回帖

yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoyan1028: 金币+2, 谢谢奥 2012-07-04 12:24:51
建议把样品前处理好好做做，还有最好用大孔径的色谱柱来做吧
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3楼2012-07-04 10:41:35
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xiaoyan1028

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2012-07-04 10:31:21
生物样品，柱子的寿命一般都不长。柱子孔径越小，越容污染。建议改用0.22um或0.2um的微孔滤膜。每次实验完成，及时清理。

恩，做完倒是及时清洗了。不过看文献，很多都是用0.45um的滤膜，做实验的时候觉得也还好。我比较过0.22和0.45的膜，感觉没什么差别。不知道对柱子来说，会不会有区别。
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4楼2012-07-04 12:21:46
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xiaoyan1028

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yugijiang at 2012-07-04 10:41:35
建议把样品前处理好好做做，还有最好用大孔径的色谱柱来做吧

看文献，前处理一般都是差不多的。提取，离心或过滤，旋蒸，复溶，过滤膜，进样。就是不知道别人做的时候会不会有沉淀。刚过完滤膜的时候是很澄清的呀，进完样，放置一段时间，就有沉淀了。
用大孔径的色谱柱，不知道对我的分离的成分会产生什么影响呢。
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5楼2012-07-04 12:24:40
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
xiaoyan1028: 金币+2, 谢谢 2012-07-04 13:46:36
建议用固相萃取柱来进行前处理
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7楼2012-07-04 12:41:13
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proxyz

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoyan1028: 金币+2, 谢谢帮忙 2012-07-04 13:49:03
我们以前做蛋白的时候都用的C8的柱子，C18的会堵
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8楼2012-07-04 13:37:46
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xiaoyan1028

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yugijiang at 2012-07-04 12:41:13
建议用固相萃取柱来进行前处理

固相萃取柱？我先了解下相关信息哈，嘿嘿。谢谢奥
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9楼2012-07-04 13:47:25
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xiaoyan1028

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by proxyz at 2012-07-04 13:37:46
我们以前做蛋白的时候都用的C8的柱子，C18的会堵

但是我不是专门做蛋白，只是样品中蛋白含量比较高。做异黄酮的话，主要还是C18柱吧
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10楼2012-07-04 13:48:45
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