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xiaoyan1028

木虫 (正式写手)

[求助] 含蛋白质的样品,进C18柱,会对柱子产生什么影响呢?

如题,最近在做大豆中活性成分提取。蛋白质含量很高。样品过0.45微米的滤膜一个小时以后,会在瓶底出现沉淀,怀疑是蛋白质。沉淀后,经过二次过滤的话会好些。想问下大家,我第一次过滤完后直接进样,会不会对柱子产生影响?主要是什么影响呢?我流动相为乙腈,水(pH=3)。
看论坛上说,蛋白会堵塞柱子,我这个已经过了0.45微米的滤膜了,会不会沉淀在柱子上呢?看文献的话,大多数人都是没有经过脱蛋白处理的呢。
谢谢大家
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助,欢迎常来交流 2012-07-04 10:34:41
xiaoyan1028: 金币+2, 谢谢帮忙 2012-07-04 12:19:59
生物样品,柱子的寿命一般都不长。柱子孔径越小,越容污染。建议改用0.22um或0.2um的微孔滤膜。每次实验完成,及时清理。
守候在风中的宁静。
2楼2012-07-04 10:31:21
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaoyan1028 at 2012-07-04 12:21:46
恩,做完倒是及时清洗了。不过看文献,很多都是用0.45um的滤膜,做实验的时候觉得也还好。我比较过0.22和0.45的膜,感觉没什么差别。不知道对柱子来说,会不会有区别。...

在保护色谱柱方面,当然是0.22um的较好了,做这些样品,最好还能使用在线过滤器和保护柱。
守候在风中的宁静。
6楼2012-07-04 12:27:03
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普通回帖

yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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xiaoyan1028: 金币+2, 谢谢奥 2012-07-04 12:24:51
建议把样品前处理好好做做,还有最好用大孔径的色谱柱来做吧
3楼2012-07-04 10:41:35
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xiaoyan1028

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2012-07-04 10:31:21
生物样品,柱子的寿命一般都不长。柱子孔径越小,越容污染。建议改用0.22um或0.2um的微孔滤膜。每次实验完成,及时清理。

恩,做完倒是及时清洗了。不过看文献,很多都是用0.45um的滤膜,做实验的时候觉得也还好。我比较过0.22和0.45的膜,感觉没什么差别。不知道对柱子来说,会不会有区别。
4楼2012-07-04 12:21:46
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xiaoyan1028

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yugijiang at 2012-07-04 10:41:35
建议把样品前处理好好做做,还有最好用大孔径的色谱柱来做吧

看文献,前处理一般都是差不多的。提取,离心或过滤,旋蒸,复溶,过滤膜,进样。就是不知道别人做的时候会不会有沉淀。刚过完滤膜的时候是很澄清的呀,进完样,放置一段时间,就有沉淀了。
用大孔径的色谱柱,不知道对我的分离的成分会产生什么影响呢。
5楼2012-07-04 12:24:40
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
xiaoyan1028: 金币+2, 谢谢 2012-07-04 13:46:36
建议用固相萃取柱来进行前处理
7楼2012-07-04 12:41:13
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proxyz

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xiaoyan1028: 金币+2, 谢谢帮忙 2012-07-04 13:49:03
我们以前做蛋白的时候都用的C8的柱子,C18的会堵
8楼2012-07-04 13:37:46
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xiaoyan1028

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yugijiang at 2012-07-04 12:41:13
建议用固相萃取柱来进行前处理

固相萃取柱?我先了解下相关信息哈,嘿嘿。谢谢奥
9楼2012-07-04 13:47:25
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xiaoyan1028

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by proxyz at 2012-07-04 13:37:46
我们以前做蛋白的时候都用的C8的柱子,C18的会堵

但是我不是专门做蛋白,只是样品中蛋白含量比较高。做异黄酮的话,主要还是C18柱吧
10楼2012-07-04 13:48:45
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