| 查看: 1901 | 回复: 8 | |||
[交流]
SDS-PAGE银染求诊断 已有5人参与
|
|
今天做了个SDS-PAGE电泳，硝酸银染色，白光反射观察，未见任何条带，甚至连Marker也没见，求大虫诊断。具体情况如下： 材料为一禾本科植物，经提取、硫酸铵分段、Sephacryl S 400层析，分别取粗提物（A）、30%硫酸铵盐析后的上清液（B）、50%硫酸铵盐析后的沉淀（C、用dH2O溶解）、Sephacryl S 400柱层析后的收集的各峰洗脱液（D、E、F、G、H）各200uL，加1mL冷丙酮混匀，-20度放置20min，12000rpm离心15min，弃上清，沉淀在4度风干。A、B、C分别用200uL去离子水，D用20uL去离子水，E—H用40uL去离子水溶解，加入5×Loading Buffer，再加入10uL巯基乙醇混匀，煮沸5min。室温冷却后12000rpm离心10min，取20uL上清液上样。 5%浓缩胶，恒压75V；7.5%分离胶，恒压100V，电泳结束后用去离子水漂洗，固定（400mL无水乙醇、100mL冰醋酸、加水至1L）30min；漂洗后敏化（6.8%无水乙酸钠、0.2%硫代硫酸钠、30%无水乙醇）30min，漂洗3×5min；0.25%硝酸银（现配，用前加甲醛）避光染色15min，漂洗2×15s；2.5%碳酸钠（用前加甲醛）显色6min；1.5%Na2EDTA终止。白光观察，胶上未见明显条带，Marker也没有带，仅在溴酚蓝处有一条黄褐色条带。 其中，样品在-20度储存一周，上样前重新煮沸3min；银染时误将去离子水当作银染液加入，10min后发觉，倒出水加入银染液染色。  Snap3.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有292人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 电泳Marker分子量的归属问题
已经有5人回复
- 蛋白用蒸馏水稀释至低浓度后跑SDS-PAGE用银染没有条带
已经有0人回复
- 做生物质谱蛋白定量的大侠请支招
已经有3人回复
- 关于SDS-PAGE出现的问题
已经有3人回复
- 请问PAGE胶每次银染时都是在同一区域出现不均匀的可能原因是什么？
已经有1人回复
- pulldown钓取膜蛋白受体
已经有0人回复
- SDS-PAGE 银染 marker晕染到其他泳道
已经有4人回复
- blue native ，SDS0-PAGE双向电泳
已经有9人回复
- 怎么才能改善SDS－PAGE银染胶的效果？
已经有5人回复
- SDS－PAGE银染不显色！
已经有12人回复
- 预防乙肝的措施
已经有6人回复
- 液相质谱的高手，帮我看下这个问题啊
已经有0人回复
- 【资料】做好电泳的关键技术及问题总结
已经有27人回复
- 【求助/交流】在SDS-PAGE当中遇到的一些问题
已经有9人回复
- 【分享】蛋白质纯化个人总结2
已经有38人回复
2楼2012-11-15 21:08:06
3楼2012-11-15 23:34:16
4楼2012-11-16 08:32:06
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
5楼2012-11-16 08:51:18
6楼2012-11-16 10:06:04
7楼2012-11-17 10:49:52
8楼2012-11-17 11:30:52
9楼2013-10-09 20:09:37
15