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SDS-PAGE银染求诊断 已有5人参与
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今天做了个SDS-PAGE电泳，硝酸银染色，白光反射观察，未见任何条带，甚至连Marker也没见，求大虫诊断。具体情况如下： 材料为一禾本科植物，经提取、硫酸铵分段、Sephacryl S 400层析，分别取粗提物（A）、30%硫酸铵盐析后的上清液（B）、50%硫酸铵盐析后的沉淀（C、用dH2O溶解）、Sephacryl S 400柱层析后的收集的各峰洗脱液（D、E、F、G、H）各200uL，加1mL冷丙酮混匀，-20度放置20min，12000rpm离心15min，弃上清，沉淀在4度风干。A、B、C分别用200uL去离子水，D用20uL去离子水，E—H用40uL去离子水溶解，加入5×Loading Buffer，再加入10uL巯基乙醇混匀，煮沸5min。室温冷却后12000rpm离心10min，取20uL上清液上样。 5%浓缩胶，恒压75V；7.5%分离胶，恒压100V，电泳结束后用去离子水漂洗，固定（400mL无水乙醇、100mL冰醋酸、加水至1L）30min；漂洗后敏化（6.8%无水乙酸钠、0.2%硫代硫酸钠、30%无水乙醇）30min，漂洗3×5min；0.25%硝酸银（现配，用前加甲醛）避光染色15min，漂洗2×15s；2.5%碳酸钠（用前加甲醛）显色6min；1.5%Na2EDTA终止。白光观察，胶上未见明显条带，Marker也没有带，仅在溴酚蓝处有一条黄褐色条带。 其中，样品在-20度储存一周，上样前重新煮沸3min；银染时误将去离子水当作银染液加入，10min后发觉，倒出水加入银染液染色。  Snap3.jpg |
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cicelyzh
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