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mango70803575

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】在SDS-PAGE当中遇到的一些问题

我做的是从真菌发酵液中筛选活性蛋白,选用SPFF柱,现已分离出几个峰,将收集的峰富集蛋白做SDS-PAGE时,因为考染有几个泳道看不清条带,于是进行银染,但银染的结果发现,除了原先考染可见的条带之外,几乎每个泳道在相同的位置都有杂带
我想问的是,所有泳道相同位置都存在的杂带,是不是因为我的分离不够彻底,还是可能存在富集过程中使用溶液的问题,或还有其他原因?
希望高手指点!
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

mango70803575(金币+1): 2010-09-20 08:15:26
引用回帖:
Originally posted by mango70803575 at 2010-09-17 09:52:37:
我做的是从真菌发酵液中筛选活性蛋白,选用SPFF柱,现已分离出几个峰,将收集的峰富集蛋白做SDS-PAGE时,因为考染有几个泳道看不清条带,于是进行银染,但银染的结果发现,除了原先考染可见的条带之外,几乎每个泳 ...

我没有用过你说的SPFF柱,不过单纯凭一个离子交换柱就想得到比较纯的蛋白,可能性不大吧。
2楼2010-09-17 17:08:18
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mango70803575

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by sqhnsd at 2010-09-17 17:08:18:

我没有用过你说的SPFF柱,不过单纯凭一个离子交换柱就想得到比较纯的蛋白,可能性不大吧。

这个可能性确实不大,但我是想看看活性峰里的蛋白大概在多少分子量
过去的一切等于零,现在的一切从零开始!
3楼2010-09-20 08:15:10
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

mango70803575(金币+1): 2010-09-25 10:40:30
引用回帖:
Originally posted by mango70803575 at 2010-09-20 08:15:10:

这个可能性确实不大,但我是想看看活性峰里的蛋白大概在多少分子量

很困难,你没有抗体。而且,活性峰的最浓蛋白,不见得是你的目的蛋白
4楼2010-09-20 08:59:58
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zxl_570

银虫 (小有名气)

mango70803575(金币+2): 2010-09-25 10:40:54
重新过下柱子,只接峰顶上那一点点跑胶再说
5楼2010-09-24 09:14:11
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zhaoge_2005

金虫 (小有名气)

mango70803575(金币+1): 2010-09-25 10:40:47
可能是蛋白纯化不彻底
6楼2010-09-24 09:23:42
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临风7071

木虫 (正式写手)

mango70803575(金币+2): 2010-09-25 10:40:41
控制好银染的时间,过长灰然出很多你不需要的带
7楼2010-09-24 22:19:15
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mango70803575

银虫 (小有名气)

silicare:确定一下是不是这个原因? 2010-09-25 11:44:53
我银染的时间确实长了……
引用回帖:
Originally posted by 临风7071 at 2010-09-24 22:19:15:
控制好银染的时间,过长灰然出很多你不需要的带

过去的一切等于零,现在的一切从零开始!
8楼2010-09-25 10:42:10
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liyong1981

金虫 (正式写手)


mango70803575(金币+1): 2010-09-26 08:47:39
冰醋酸多加点~
9楼2010-09-25 12:00:16
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欧阳惜若

mango70803575(金币+1): 2010-09-26 08:47:44
还是柱子没有分开的问题,纯化不彻底。
10楼2010-09-25 22:50:44
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