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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】在SDS-PAGE当中遇到的一些问题
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mango70803575

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】在SDS-PAGE当中遇到的一些问题

我做的是从真菌发酵液中筛选活性蛋白，选用SPFF柱，现已分离出几个峰，将收集的峰富集蛋白做SDS-PAGE时，因为考染有几个泳道看不清条带，于是进行银染，但银染的结果发现，除了原先考染可见的条带之外，几乎每个泳道在相同的位置都有杂带
我想问的是，所有泳道相同位置都存在的杂带，是不是因为我的分离不够彻底，还是可能存在富集过程中使用溶液的问题，或还有其他原因？
希望高手指点！
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过去的一切等于零，现在的一切从零开始！
1楼 2010-09-17 09:52:37
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
mango70803575(金币+1): 2010-09-20 08:15:26
引用回帖:
Originally posted by mango70803575 at 2010-09-17 09:52:37:
我做的是从真菌发酵液中筛选活性蛋白，选用SPFF柱，现已分离出几个峰，将收集的峰富集蛋白做SDS-PAGE时，因为考染有几个泳道看不清条带，于是进行银染，但银染的结果发现，除了原先考染可见的条带之外，几乎每个泳 ...

我没有用过你说的SPFF柱，不过单纯凭一个离子交换柱就想得到比较纯的蛋白，可能性不大吧。
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2楼2010-09-17 17:08:18
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mango70803575

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sqhnsd at 2010-09-17 17:08:18:

我没有用过你说的SPFF柱，不过单纯凭一个离子交换柱就想得到比较纯的蛋白，可能性不大吧。

这个可能性确实不大，但我是想看看活性峰里的蛋白大概在多少分子量
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3楼2010-09-20 08:15:10
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
mango70803575(金币+1): 2010-09-25 10:40:30
引用回帖:
Originally posted by mango70803575 at 2010-09-20 08:15:10:

这个可能性确实不大，但我是想看看活性峰里的蛋白大概在多少分子量

很困难，你没有抗体。而且，活性峰的最浓蛋白，不见得是你的目的蛋白
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4楼2010-09-20 08:59:58
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zxl_570

银虫 (小有名气)
mango70803575(金币+2): 2010-09-25 10:40:54
重新过下柱子，只接峰顶上那一点点跑胶再说
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5楼2010-09-24 09:14:11
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zhaoge_2005

金虫 (小有名气)
mango70803575(金币+1): 2010-09-25 10:40:47
可能是蛋白纯化不彻底
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6楼2010-09-24 09:23:42
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临风7071

木虫 (正式写手)
mango70803575(金币+2): 2010-09-25 10:40:41
控制好银染的时间，过长灰然出很多你不需要的带
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7楼2010-09-24 22:19:15
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mango70803575

银虫 (小有名气)
silicare:确定一下是不是这个原因？ 2010-09-25 11:44:53
我银染的时间确实长了……
引用回帖:
Originally posted by 临风7071 at 2010-09-24 22:19:15:
控制好银染的时间，过长灰然出很多你不需要的带

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8楼2010-09-25 10:42:10
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liyong1981

金虫 (正式写手)
mango70803575(金币+1): 2010-09-26 08:47:39
冰醋酸多加点~
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9楼2010-09-25 12:00:16
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欧阳惜若

mango70803575(金币+1): 2010-09-26 08:47:44
还是柱子没有分开的问题，纯化不彻底。
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10楼2010-09-25 22:50:44
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