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@木笔@

木虫 (小有名气)

[求助] 为何SDS-PAGE胶Marker很清晰,而其他带颜色均较浅? 已有2人参与

请问,各位,我的SDS-PAGE胶这两天跑的时候Marker很清晰,而其他带颜色均较浅,以至于都没有办法分清楚目的蛋白的条带了,请问各位有好的建议么?多谢了
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做最好的自己!
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 谢谢参与 2014-04-01 16:35:01
不知道你是直接染胶还是做western,如果是直接染胶的话可能是蛋白上样量太低,多上点试试
如果是做western的话,出现这种情况有以下几种原因:
1. 蛋白上样量不够,导致一抗二抗结合的少。
2. 一抗特异性不强,结合不了目的蛋白,你所看到的带都是杂带。我曾经出现过这种情况,针对一种蛋白有很多公司都有相应的抗体,这些抗体的特异性不一样,我有次试HA-tag的抗体试了4个公司的,最后才找到一个非常好的抗体,最后就一直沿用。可以换抗体试试。
3. 你的抗体稀释倍数过高,导致没有结合。或者封闭时间太长。
2楼2014-03-28 22:38:46
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@木笔@

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-28 22:38:46
不知道你是直接染胶还是做western,如果是直接染胶的话可能是蛋白上样量太低,多上点试试
如果是做western的话,出现这种情况有以下几种原因:
1. 蛋白上样量不够,导致一抗二抗结合的少。
2. 一抗特异性不强,结 ...

我是用考马斯亮蓝直接染色的。上样量以前也是那么多条带还是可以分得清楚的,所以我在想是不是染色液出问题了,昨天重新配置了。等结果出来了再看吧
做最好的自己!
3楼2014-03-29 20:58:07
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jiangxincsu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2014-04-01 16:35:31
我觉得染色液的问题不大,因为mark可以看的清楚,估计是上样量的问题
4楼2014-04-01 13:45:00
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@木笔@

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jiangxincsu at 2014-04-01 13:45:00
我觉得染色液的问题不大,因为mark可以看的清楚,估计是上样量的问题

请问你们是稳流还是稳压跑的呀?
做最好的自己!
5楼2014-04-01 14:15:26
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jiangxincsu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by @木笔@ at 2014-04-01 14:15:26
请问你们是稳流还是稳压跑的呀?...

我们一般稳压,蛋白是100V左右,菌液一般开始100V之后220V左右,视情况定
6楼2014-04-03 19:01:55
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Reiki

铁虫 (初入文坛)

同样遇到此问题,请问解决了吗?
7楼2021-05-19 23:31:46
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