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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE：缓冲液和蛋白样品混合后变浅绿色？？？
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heying714

银虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE：缓冲液和蛋白样品混合后变浅绿色？？？

两次跑SDS-PAGE都出现这样的情况：取10微升buffer（蓝色，正常），加入10微升蛋白样品，混合后，溶液变成浅绿色。跑出来的胶虽然条带较浅，倒也正常。觉得很奇怪，有没有高手能帮忙解释一下。

一次样品是黑曲霉分泌表达的木聚糖酶，一次是桔青霉分泌表达的核酸酶P1。
不知道是不是发酵体系中有什么物质跟buffer发生作用了
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1楼 2012-12-30 16:10:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by heying714 at 2013-01-07 20:05:04
这种颜色变化的实质是什么反应呢？...

溴酚蓝是一种酸碱指示剂，在酸性条件下显黄色，随pH升高显蓝色，变色范围在3.0-4.6。一般的电泳条件下的缓冲液pH是中性-碱性的，所以是蓝色的。你的酶液偏酸，可能落入其变色范围。
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10楼2013-01-08 07:34:16
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
heying714: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-06 21:16:38
你的蛋白样品所用的缓冲液pH是多少？有的protocol里loading buffer不用缓冲液，可能会造成溴酚蓝变色。
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2楼2012-12-31 06:44:58
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是跟pH 有关吧

溴酚蓝 有时候 它自己也会 出来两条带啊~~~说不定是一些不同的型体呢~~
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3楼2012-12-31 10:28:34
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heying714

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by porphybaby at 2012-12-31 10:28:34
应该是跟pH 有关吧

溴酚蓝 有时候 它自己也会 出来两条带啊~~~说不定是一些不同的型体呢~~

就是，还没跑胶，混合的时候就变色了。我的酶液ph值大概是4～5
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4楼2013-01-06 21:19:05
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heying714

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-31 06:44:58
你的蛋白样品所用的缓冲液pH是多少？有的protocol里loading buffer不用缓冲液，可能会造成溴酚蓝变色。

我的酶液ph值大概是4～5
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5楼2013-01-06 21:20:12
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2013-01-07 17:02:31
heying714: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-07 20:03:25
引用回帖:
5楼: Originally posted by heying714 at 2013-01-06 21:20:12
我的酶液ph值大概是4～5...

一般上样buffer的pH是6.8，和浓缩胶的pH是一致的。太酸或者太碱对变性和还原的效果都有影响。可能是你的酶液的pH低，是在缓冲液里面的，所以影响用上样buffer处理样品的pH。一般处理样品的时候稀释酶液用水，然后加2×上样buffer，你可以用100-200mM的Tris（pH6.8）稀释酶液。
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6楼2013-01-07 02:50:48
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yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
heying714: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-07 20:03:40
内容已删除
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7楼2013-01-07 16:33:06
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heying714

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yxncas-2012 at 2013-01-07 16:33:06
样品pH太低，你加上10ul 1M NaOH，颜色就会变回来的！一般更酸一些的还会变成黄色呢！

咦？下次试试～但是这种颜色变化到底是什么反应呢？
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8楼2013-01-07 20:04:30
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heying714

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-07 02:50:48
一般上样buffer的pH是6.8，和浓缩胶的pH是一致的。太酸或者太碱对变性和还原的效果都有影响。可能是你的酶液的pH低，是在缓冲液里面的，所以影响用上样buffer处理样品的pH。一般处理样品的时候稀释酶液用水，然后加 ...

这种颜色变化的实质是什么反应呢？
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9楼2013-01-07 20:05:04
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