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飘零的叶子

新虫 (小有名气)


[交流] SDS-PAGE中上样缓冲液中加入DTT是什么作用

如题,哪位大侠能给解释下上样缓冲液中DTT的作用啊,加与不加DTT在SDS-PAGE中有什么区别?!
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yingyangyang

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-14 13:41:36
DTT是二硫苏糖醇,是一种强还原剂,作用类似于巯基乙醇。但是毒性比巯基乙醇低,但是价格贵。主要作用是防止DNA二聚化!
2楼2012-08-13 17:15:19
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lou87

新虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-08-14 13:41:47
是一种强还原剂,能使半胱氨酸之间的二硫键断裂,而sds可以破坏蛋白质的二三级结构,二者使蛋白质呈线性,忽略电荷因素,其迁移率可看成与分子大小成正比。如果未加DTT,则蛋白质的线性多肽链未完全打开,其分子空间结构也会影响迁移率 。
3楼2012-08-13 17:52:47
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by lou87 at 2012-08-13 17:52:47
是一种强还原剂,能使半胱氨酸之间的二硫键断裂,而sds可以破坏蛋白质的二三级结构,二者使蛋白质呈线性,忽略电荷因素,其迁移率可看成与分子大小成正比。如果未加DTT,则蛋白质的线性多肽链未完全打开,其分子空间 ...

请问您有做过上样缓冲液中不加DTT的SDS-PAGE么?影响很大吗?
4楼2012-08-13 19:36:57
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scutphoenix

木虫 (正式写手)



飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
很大,之前做个PDGF,一种二聚体蛋白,加了就是单体,不加就是二聚体,大小很明显呀
5楼2012-08-13 21:58:02
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dongniaoxin

铁杆木虫 (正式写手)



飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
加DTT就是做还原电泳,可以打开蛋白中的二硫键;不加DTT的是非还原电泳,蛋白中若是有二聚体、多聚体就会显现出来
6楼2012-08-15 08:35:41
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sl35537417

木虫 (正式写手)



飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
打开蛋白中的二硫键
8楼2012-08-15 09:10:44
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)



飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
感觉这跟你的蛋白组成有关,如果不含半胱氨酸可能影响较小
9楼2012-08-16 09:33:48
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lou87

新虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2012-08-13 19:36:57
请问您有做过上样缓冲液中不加DTT的SDS-PAGE么?影响很大吗?...

没有做过,都加了的。个人认为影响大小取决于你的蛋白样中具体所含二硫键多少,越多影响越大。
10楼2012-10-07 21:18:20
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)


引用回帖:
6楼: Originally posted by dongniaoxin at 2012-08-15 08:35:41
加DTT就是做还原电泳,可以打开蛋白中的二硫键;不加DTT的是非还原电泳,蛋白中若是有二聚体、多聚体就会显现出来

哦,知道了,谢谢
7楼2012-08-15 08:58:57
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nangyingyuan

金虫 (正式写手)



飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
个人认为影响大小取决于你的蛋白样中具体所含二硫键多少,越多影响越大。
11楼2012-12-18 14:23:49
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