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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE中上样缓冲液中加入DTT是什么作用
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[交流] SDS-PAGE中上样缓冲液中加入DTT是什么作用

如题，哪位大侠能给解释下上样缓冲液中DTT的作用啊，加与不加DTT在SDS-PAGE中有什么区别？！
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1楼 2012-08-13 17:03:28
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lou87

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-08-14 13:41:47
是一种强还原剂，能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，而sds可以破坏蛋白质的二三级结构，二者使蛋白质呈线性，忽略电荷因素，其迁移率可看成与分子大小成正比。如果未加DTT，则蛋白质的线性多肽链未完全打开，其分子空间结构也会影响迁移率 。
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3楼2012-08-13 17:52:47
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lou87

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2012-08-13 19:36:57
请问您有做过上样缓冲液中不加DTT的SDS-PAGE么？影响很大吗？...

没有做过，都加了的。个人认为影响大小取决于你的蛋白样中具体所含二硫键多少，越多影响越大。
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10楼2012-10-07 21:18:20
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普通回帖

yingyangyang

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-14 13:41:36
DTT是二硫苏糖醇，是一种强还原剂，作用类似于巯基乙醇。但是毒性比巯基乙醇低，但是价格贵。主要作用是防止DNA二聚化！
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2楼2012-08-13 17:15:19
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lou87 at 2012-08-13 17:52:47
是一种强还原剂，能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，而sds可以破坏蛋白质的二三级结构，二者使蛋白质呈线性，忽略电荷因素，其迁移率可看成与分子大小成正比。如果未加DTT，则蛋白质的线性多肽链未完全打开，其分子空间 ...

请问您有做过上样缓冲液中不加DTT的SDS-PAGE么？影响很大吗？
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4楼2012-08-13 19:36:57
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scutphoenix

木虫 (正式写手)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
很大，之前做个PDGF，一种二聚体蛋白，加了就是单体，不加就是二聚体，大小很明显呀
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5楼2012-08-13 21:58:02
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dongniaoxin

铁杆木虫 (正式写手)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
加DTT就是做还原电泳，可以打开蛋白中的二硫键；不加DTT的是非还原电泳，蛋白中若是有二聚体、多聚体就会显现出来
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6楼2012-08-15 08:35:41
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dongniaoxin at 2012-08-15 08:35:41
加DTT就是做还原电泳，可以打开蛋白中的二硫键；不加DTT的是非还原电泳，蛋白中若是有二聚体、多聚体就会显现出来

哦，知道了，谢谢
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7楼2012-08-15 08:58:57
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sl35537417

木虫 (正式写手)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
打开蛋白中的二硫键
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8楼2012-08-15 09:10:44
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
感觉这跟你的蛋白组成有关，如果不含半胱氨酸可能影响较小
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9楼2012-08-16 09:33:48
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nangyingyuan

金虫 (正式写手)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
个人认为影响大小取决于你的蛋白样中具体所含二硫键多少，越多影响越大。
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11楼2012-12-18 14:23:49
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