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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】Tris-Gly电泳缓冲液的pH值问题（SDS-PAGE）
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zplipeng

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】Tris-Gly电泳缓冲液的pH值问题（SDS-PAGE）

还原性不连续SDS-PAGE分离蛋白质时，利用了不同的缓冲液pH值特点来达到更好的分离蛋白的目的。
分子克隆指南要求：
分离胶（pH8.8），浓缩胶（pH6.8），Tris-Gly缓冲液（pH8.3）
但是，在Tris-Gly电极缓冲液配制 时并没有说明要求调节pH至8.3，但是原理上分析是需要8.3的pH值的。
在实际的溶液配制时，却发现5X缓冲液的pH值为8.7，问一下各位是药品的问题么？各位有没有亲自测过pH值的，是不是需要调节到8.3再使用呢？
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1楼 2010-12-08 17:40:58
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rivers_123

铁虫 (小有名气)
zplipeng(金币+3): 2011-04-26 08:10:31
Tris-Gly调出来时8.3 合适，我们是10*的
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2楼2010-12-10 14:05:21
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zplipeng

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by rivers_123 at 2010-12-10 14:05:21:
Tris-Gly调出来时8.3 合适，我们是10*的

这位的意思是说：稀释到1倍时，是8.3是么？？？
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3楼2010-12-11 08:59:28
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pidou213

木虫 (正式写手)
zplipeng(金币+2): 2011-04-26 08:10:42
我还真的没有测过呢，不过蛋白分开得还不错
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4楼2010-12-11 09:09:20
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
zplipeng(金币+3): 2011-04-26 08:10:51
引用回帖:
Originally posted by zplipeng at 2010-12-08 17:40:58:
还原性不连续SDS-PAGE分离蛋白质时，利用了不同的缓冲液pH值特点来达到更好的分离蛋白的目的。
分子克隆指南要求：
分离胶（pH8.8），浓缩胶（pH6.8），Tris-Gly缓冲液（pH8.3）
但是，在Tris-Gly电极缓冲液配 ...

呵呵，一般来说不用调的，1*的大概就是8.3左右。当然这跟你们所用水的pH也有一点关系。

汪家政的那本书上是说不用调的，所以一直也不调。我们一次配20L的10*buffer，也没有调。跑出来的图也很漂亮。
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5楼2010-12-11 10:33:22
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
zplipeng(金币+1): 2011-04-26 08:10:58
本人实验室常配的是5×电泳缓冲液，也没调节过pH,图也很好。
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6楼2010-12-11 16:56:47
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zplipeng at 2010-12-11 08:59:28:

这位的意思是说：稀释到1倍时，是8.3是么？？？

稀释前后不变。
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7楼2010-12-11 16:58:13
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
zplipeng(金币+1): 2011-04-26 08:11:03
一直就没有测过pH到底是多少，

只是直接配完稀释用就行，

效果一样很好
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8楼2010-12-12 00:33:10
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guang012345

新虫 (初入文坛)
我们做的时候好像也是没有调PH的，我用的也是5X的缓冲液
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9楼2011-01-14 22:06:22
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rivers_123

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
是将10*调到8.3，然后跑胶用稀释好的1*(900ddH2O+100母液）1h，转得时候用1*Transfer 3h就可以了。但蛋白的分子量不同转得时间也有差异，还有转膜注意事项等，比如，大分子蛋白用厚胶转时间就要长些，嘿嘿
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10楼2011-09-21 18:54:52
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