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zplipeng

金虫 (著名写手)

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[交流] 【求助/交流】Tris-Gly电泳缓冲液的pH值问题（SDS-PAGE）

还原性不连续SDS-PAGE分离蛋白质时，利用了不同的缓冲液pH值特点来达到更好的分离蛋白的目的。
分子克隆指南要求：
分离胶（pH8.8），浓缩胶（pH6.8），Tris-Gly缓冲液（pH8.3）
但是，在Tris-Gly电极缓冲液配制时并没有说明要求调节pH至8.3，但是原理上分析是需要8.3的pH值的。
在实际的溶液配制时，却发现5X缓冲液的pH值为8.7，问一下各位是药品的问题么？各位有没有亲自测过pH值的，是不是需要调节到8.3再使用呢？

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1楼 2010-12-08 17:40:58

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

zplipeng(金币+3): 2011-04-26 08:10:51

引用回帖:

Originally posted by zplipeng at 2010-12-08 17:40:58:
还原性不连续SDS-PAGE分离蛋白质时，利用了不同的缓冲液pH值特点来达到更好的分离蛋白的目的。
分子克隆指南要求：
分离胶（pH8.8），浓缩胶（pH6.8），Tris-Gly缓冲液（pH8.3）
但是，在Tris-Gly电极缓冲液配 ...

呵呵，一般来说不用调的，1*的大概就是8.3左右。当然这跟你们所用水的pH也有一点关系。

汪家政的那本书上是说不用调的，所以一直也不调。我们一次配20L的10*buffer，也没有调。跑出来的图也很漂亮。