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heying714

银虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE:缓冲液和蛋白样品混合后变浅绿色???

两次跑SDS-PAGE都出现这样的情况:取10微升buffer(蓝色,正常),加入10微升蛋白样品,混合后,溶液变成浅绿色。跑出来的胶虽然条带较浅,倒也正常。觉得很奇怪,有没有高手能帮忙解释一下。

一次样品是黑曲霉分泌表达的木聚糖酶,一次是桔青霉分泌表达的核酸酶P1。
不知道是不是发酵体系中有什么物质跟buffer发生作用了
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2013-01-07 17:02:31
heying714: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-07 20:03:25
引用回帖:
5楼: Originally posted by heying714 at 2013-01-06 21:20:12
我的酶液ph值大概是4~5...

一般上样buffer的pH是6.8,和浓缩胶的pH是一致的。太酸或者太碱对变性和还原的效果都有影响。可能是你的酶液的pH低,是在缓冲液里面的,所以影响用上样buffer处理样品的pH。一般处理样品的时候稀释酶液用水,然后加2×上样buffer,你可以用100-200mM的Tris(pH6.8)稀释酶液。
6楼2013-01-07 02:50:48
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
heying714: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-06 21:16:38
你的蛋白样品所用的缓冲液pH是多少?有的protocol里loading buffer不用缓冲液,可能会造成溴酚蓝变色。
2楼2012-12-31 06:44:58
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是跟pH 有关吧

溴酚蓝 有时候 它自己也会 出来两条带啊~~~说不定是一些不同的型体呢~~
3楼2012-12-31 10:28:34
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heying714

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by porphybaby at 2012-12-31 10:28:34
应该是跟pH 有关吧

溴酚蓝 有时候 它自己也会 出来两条带啊~~~说不定是一些不同的型体呢~~

就是,还没跑胶,混合的时候就变色了。我的酶液ph值大概是4~5
4楼2013-01-06 21:19:05
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