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@木笔@

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[求助] 为何SDS-PAGE胶Marker很清晰，而其他带颜色均较浅？已有2人参与

请问，各位，我的SDS-PAGE胶这两天跑的时候Marker很清晰，而其他带颜色均较浅，以至于都没有办法分清楚目的蛋白的条带了，请问各位有好的建议么？多谢了

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做最好的自己！

1楼 2014-03-28 21:44:20

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d00614028

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 谢谢参与 2014-04-01 16:35:01

不知道你是直接染胶还是做western，如果是直接染胶的话可能是蛋白上样量太低，多上点试试
如果是做western的话，出现这种情况有以下几种原因：
1. 蛋白上样量不够，导致一抗二抗结合的少。
2. 一抗特异性不强，结合不了目的蛋白，你所看到的带都是杂带。我曾经出现过这种情况，针对一种蛋白有很多公司都有相应的抗体，这些抗体的特异性不一样，我有次试HA-tag的抗体试了4个公司的，最后才找到一个非常好的抗体，最后就一直沿用。可以换抗体试试。
3. 你的抗体稀释倍数过高，导致没有结合。或者封闭时间太长。

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2楼2014-03-28 22:38:46

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@木笔@

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引用回帖:

2楼: Originally posted by d00614028 at 2014-03-28 22:38:46
不知道你是直接染胶还是做western，如果是直接染胶的话可能是蛋白上样量太低，多上点试试
如果是做western的话，出现这种情况有以下几种原因：
1. 蛋白上样量不够，导致一抗二抗结合的少。
2. 一抗特异性不强，结 ...

我是用考马斯亮蓝直接染色的。上样量以前也是那么多条带还是可以分得清楚的，所以我在想是不是染色液出问题了，昨天重新配置了。等结果出来了再看吧

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做最好的自己！

3楼2014-03-29 20:58:07

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