【答案】应助回帖

如果能让自己不在等待中苍老，又何尝不想活得洒脱。。。

11楼2014-05-15 13:53:24

valleybeau

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9楼: Originally posted by cherishhp at 2014-05-15 13:48:12
样品太浓了，把marker挤着了

这个问题已经解决了，解决的方法是每个孔的上样体积一样。

12楼2014-05-15 13:56:27

valleybeau

铁虫 (初入文坛)

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11楼: Originally posted by tujuo at 2014-05-15 13:53:24
你可以在空白孔和markrr孔补适量的上样缓冲液。而且你的蛋白提的也不太好，看起来条带分不开。

每个孔加了同样的体积，确实没有出现上下宽窄不一的情况。条带还是不清晰，又提了一遍，看看结果再说吧。

13楼2014-05-15 13:59:41

fifiss

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【答案】应助回帖

样品太浓了，上样少点

14楼2014-05-15 20:29:51

pengchenping

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【答案】应助回帖

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8楼: Originally posted by valleybeau at 2014-05-15 13:25:20
我用80V的电压跑了浓缩胶与分离胶，分离胶改为7.5%,发现条带还没有完全分离开来的时候就跑到底了，比如marker有7条带，只跑出来5条，样品蛋白条带也明显下移，是不是由于分离胶电压太小的原因？...

胶浓度也太低了吧

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15楼2014-07-07 20:49:45

凌波丽

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【答案】应助回帖

SDS电泳带变宽的原因和改进措施(2013-10-7)

在下写的，参考一下了

1.原因一：上样量过多，应该减少上样量。对策：加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15μL（即2-10μg蛋白质）。如果样品很稀上样量可以达到100μL。
2.原因二：样品溶解不完全。
对策：
（1）样品应该充分溶解：保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解，上样前最好离心一下，实在溶解不掉的颗粒就去掉。
(2)可以根据分子量标准的蛋白质试剂盒的要求加入样品溶解液；如果是自行配置标准和未知样品，按照0.5-1.0mg/L样品溶解液。溶解后，将其转移至Eppendorf管，盖上盖子（可以在盖子处加上卡子）后在110度沸水中水浴加热3分钟（可以在薄泡沫塑料板上钻出几个与Eppendorf管直径形同的圆洞，Eppendorf管放下去直到盖子边缘约束不能再往下为止，把薄泡沫塑料板的暴露出Eppendorf管的管体大部分的那一面放入沸水浴锅中，薄泡沫塑料板自然飘在沸水表面，便于取用和加热，也可避免沸水溅起。可以一批对于多个Eppendorf管进行不同时间的沸水浴。不要把Eppendorf管扔进沸水浴锅中，盖子可能会被冲开），而后在室温下冷却待用。如果较长时间不用，则将样品放入零下20度冰箱中储存，需用时在取出后使用前在110度沸水中加热3分钟室温冷却后再上样，以去掉样品蛋白质中的亚稳态聚合体。
（3）改变样品缓冲溶液使得样品能够充分溶解，SDS 用量要充分。
原因三：SDS电泳带与邻近蛋白质电泳相连。除了上样量过多和样品溶解不完全外，凝胶的加样孔泄露会使得电泳带变宽。加样孔泄露往往由于凝胶与玻璃板之间产生裂纹引起。对策：此时只能重新制备凝胶，梳子拔起时要小心等凝胶凝聚完毕，速度不宜过快，拔起的方向要垂直于凝胶表面；要避免凝胶两侧的玻璃板与凝胶之间产生裂纹，在凝胶制备过程中不要挤压凝胶两侧的玻璃板。

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16楼2014-07-07 23:46:17