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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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晴空Alex

铜虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE跑出来的条带不清晰

我用全细胞跑出来的条带比较清晰，用提纯的蛋白跑出来的条带反而很模糊，我问问可以进行怎样的改进？我用的材料是蓝藻细胞！
全细胞电泳

提取蛋白电泳

[ Last edited by 晴空Alex on 2011-7-23 at 14:05 ]
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多读文献少睡觉
1楼 2011-07-23 14:04:24
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psh2009

金虫 (正式写手)
★
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-07-23 17:15:38
我以前也做过类似的，也是蓝藻的，你能不能把你电泳条件说一下呢？比如分离胶和浓缩胶的浓度？电流电压？
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书山有路勤为径，学海无涯苦作舟！
2楼2011-07-23 14:40:51
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晴空Alex

铜虫 (初入文坛)
dhd997: 可以引用回复 2011-07-24 09:11:07
分离胶的浓度是10%，浓缩胶3%，电流20mA电压120v，蛋白样品是用乙醇沉淀法从溶液中沉淀出来，然后去上清，加上样缓冲液煮沸5min。在点样前先5000g离心1min，然后取上清液进行点样。跪求老兄帮忙！！！
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多读文献少睡觉
3楼2011-07-23 22:38:17
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晴空Alex

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 晴空Alex at 2011-07-23 14:04:24:
我用全细胞跑出来的条带比较清晰，用提纯的蛋白跑出来的条带反而很模糊，我问问可以进行怎样的改进？我用的材料是蓝藻细胞！
全细胞电泳

[eimg]2a/bc/1119540_ ...

分离胶的浓度是10%，浓缩胶3%，电流20mA电压120v，蛋白样品是用乙醇沉淀法从溶液中沉淀出来，然后去上清，加上样缓冲液煮沸5min。在点样前先5000g离心1min，然后取上清液进行点样。跪求老兄帮忙！！！
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多读文献少睡觉
4楼2011-07-23 22:39:29
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晴空Alex

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by psh2009 at 2011-07-23 14:40:51:
我以前也做过类似的，也是蓝藻的，你能不能把你电泳条件说一下呢？比如分离胶和浓缩胶的浓度？电流电压？

分离胶的浓度是10%，浓缩胶3%，电流20mA电压120v，蛋白样品是用乙醇沉淀法从溶液中沉淀出来，然后去上清，加上样缓冲液煮沸5min。在点样前先5000g离心1min，然后取上清液进行点样。跪求老兄帮忙！！！
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多读文献少睡觉
5楼2011-07-23 22:40:24
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psh2009

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-24 09:11:25
晴空Alex(金币+15): 2011-07-24 09:31:18
引用回帖:
Originally posted by 晴空Alex at 2011-07-23 22:40:24:
分离胶的浓度是10%，浓缩胶3%，电流20mA电压120v，蛋白样品是用乙醇沉淀法从溶液中沉淀出来，然后去上清，加上样缓冲液煮沸5min。在点样前先5000g离心1min，然后取上清液进行点样。跪求老兄帮忙！！！

嗯，10%的分离胶应该也行，我用的12%的，从第二个图里我觉得你点样浓度有点太高吧，你从细胞里把蛋白沉淀出来，是不是相当于浓缩了？具体操作我不清楚，建议点样量减半试一试
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书山有路勤为径，学海无涯苦作舟！
6楼2011-07-24 04:08:27
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晴空Alex

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by psh2009 at 2011-07-24 04:08:27:
嗯，10%的分离胶应该也行，我用的12%的，从第二个图里我觉得你点样浓度有点太高吧，你从细胞里把蛋白沉淀出来，是不是相当于浓缩了？具体操作我不清楚，建议点样量减半试一试

好的，我试试哈。另外网上说我的情况有可能是样品在电泳过程中反复沉降与溶解导致了拖尾，你觉得有什么解决办法吗？
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多读文献少睡觉
7楼2011-07-24 09:30:59
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psh2009

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 晴空Alex at 2011-07-24 09:30:59:
好的，我试试哈。另外网上说我的情况有可能是样品在电泳过程中反复沉降与溶解导致了拖尾，你觉得有什么解决办法吗？

这个我还是觉得与电压电流有关，或许是电压太大了，调小试一试
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书山有路勤为径，学海无涯苦作舟！
8楼2011-07-24 10:03:32
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btx362237729

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-07-30 13:14:43
晴空Alex(金币+5): 2011-08-12 09:19:56
电压太高了。。。换成60V慢慢跑
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人生最黑暗的时光终于过去了
9楼2011-07-30 11:11:41
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lsc0424

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

晴空Alex(金币+5): 我用冰水冷却的 2011-08-12 09:21:11
蛋白明显是降解了，另外天热，注意跑电泳时冷却，否则就会出现拖尾及笑脸的情况。
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10楼2011-07-30 13:55:12
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