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听说你嫁了

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-page 电泳时,样品很粘稠,跑不太动 已有2人参与

样品如果不稀释的话,因为样品很粘稠,有点跑不动,而且跑完后未经染色,整个泳道已经有样品原来的颜色了,如果将其稀释后,样品浓度又太低,看不到目的条带,如图,左边的浓度比较大,所以染色后成这样子,右边的稀释后,粘性就比较小了,可是又看不到目的条带了,请问能有什么办法可以解决这个问题吗,怎么样才能跑到胶?
SDS-page 电泳时,样品很粘稠,跑不太动
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare: 金币+3, BioEPI+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-08-01 10:57:10
如果目的蛋白可溶建议离心,取上清进行跑胶,如果不可溶,用8 M尿素,6M盐酸胍进行溶解后,离心,取上清跑胶!Good luck!
互助互励,共奋共进!!
11楼2013-08-01 09:00:37
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-07-23 22:43:48
稀释样品,增加点样体积。我觉得你的4个样品中,第三个还可以。你要的条带是染出来那条吗?
2楼2013-07-23 00:42:48
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主你的样品里面粘的东西就是你要看的蛋白?
3楼2013-07-23 01:38:00
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用含高浓度NaCl的溶液溶解, 最终NaCl浓度调到200-300mM
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2013-07-23 04:01:13
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yakir

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
样??应该糖基化程度比较高,用去糖基化酶酶切一下,然???把酶切??和酶切???的放在一起跑一张,应该看上去会??错的。
一步一步!
5楼2013-07-23 13:41:29
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yakir

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-07-23 22:44:11
怎么会是乱码呢?
样品糖基化程度比较高,用去糖基化酶酶切一下再跑电泳应该就好了。
一步一步!
6楼2013-07-23 13:43:04
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zhaoxr0311

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-07-23 22:44:18
粘的东西是什么?可以适当把胶的浓度降低
7楼2013-07-23 13:56:51
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biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

你的样品时什么? 细胞裂解液?

你试一下把样品用小号针头的注射器抽几下。
8楼2013-07-26 10:18:47
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忘性大啊

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare: 金币+3, 欢迎新虫发帖交流 2013-07-29 11:57:16
silicare: 应助指数+1 2013-07-29 11:57:22
制好样品后沸水浴20-30min再跑胶。制样时要将样品吹打混匀。
9楼2013-07-29 10:59:29
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秋水素心

银虫 (小有名气)

楼主你煮样后上样前没离心吧
认真过好每一天!
10楼2013-07-31 19:55:03
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