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jessica_nn

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于SDS-PAGE电泳的问题

SDS-PAGE电泳跑成这样是什么原因?12%的浓缩胶和5%的分离胶,浓缩胶电压85V,分离胶电压120V,恒压的情况下,电流一直很低,大概在22-15A,而且样品是在浓缩胶和分离胶的分界面才压成一条线的,如图。请高手赐教!
这个是染色后的胶


进入分离胶之前
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析,以后常来 2013-05-04 07:54:05
jessica_nn: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-09 19:48:20
样品里含有较多盐或者离子强度太大。也有可能是样品变性处理不理想。
2楼2013-05-04 00:39:37
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HTGe

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析 2013-05-05 07:39:31
样品没处理好,首先是变性处理问题(原因详见SDS-PAGE原理);另外,点样没点好,很明显跑偏了呵呵;最后,浓缩胶也有问题,没有达到理想的浓缩效果;可以再参考下分子克隆或其它实验手册。
3楼2013-05-04 11:33:53
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huizhengliu

木虫 (小有名气)

★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-05-05 07:39:43
感觉是样品的问题,变性时间可以加长,另外,配胶的tris注意下pH值,胶混均匀了再倒,注意这些就没问题了
4楼2013-05-04 14:51:01
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上陌

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 鼓励新虫发帖,尤其是应助 2013-05-06 08:34:31
感觉是样品处理的问题,是否充分变形,灌胶前胶有没有混匀?
5楼2013-05-05 20:46:04
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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)

盐浓度高了
6楼2013-05-06 10:57:51
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