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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于SDS-PAGE电泳的问题
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jessica_nn

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于SDS-PAGE电泳的问题

SDS-PAGE电泳跑成这样是什么原因？12%的浓缩胶和5%的分离胶，浓缩胶电压85V，分离胶电压120V，恒压的情况下，电流一直很低，大概在22-15A，而且样品是在浓缩胶和分离胶的分界面才压成一条线的，如图。请高手赐教！
这个是染色后的胶


进入分离胶之前
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1楼 2013-05-03 21:13:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析，以后常来 2013-05-04 07:54:05
jessica_nn: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-09 19:48:20
样品里含有较多盐或者离子强度太大。也有可能是样品变性处理不理想。
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2楼2013-05-04 00:39:37
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HTGe

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析 2013-05-05 07:39:31
样品没处理好，首先是变性处理问题（原因详见SDS-PAGE原理）；另外，点样没点好，很明显跑偏了呵呵；最后，浓缩胶也有问题，没有达到理想的浓缩效果；可以再参考下分子克隆或其它实验手册。
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3楼2013-05-04 11:33:53
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huizhengliu

木虫 (小有名气)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-05-05 07:39:43
感觉是样品的问题，变性时间可以加长，另外，配胶的tris注意下pH值，胶混均匀了再倒，注意这些就没问题了
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4楼2013-05-04 14:51:01
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上陌

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 鼓励新虫发帖，尤其是应助 2013-05-06 08:34:31
感觉是样品处理的问题，是否充分变形，灌胶前胶有没有混匀？
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5楼2013-05-05 20:46:04
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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)
盐浓度高了
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6楼2013-05-06 10:57:51
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