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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Tricine SDS PAGE蛋白电泳问题
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cole8608

金虫 (小有名气)

[求助] Tricine SDS PAGE蛋白电泳问题

大家好，最近开始做大约5kDa大小的蛋白电泳，进行Tricine SDS PAGE电泳，我配的胶是三层胶，当样品进行到分离胶一半的时候，样品和蛋白Marker均停止电泳，而且蛋白样品出现的带与Marker显示的带大小不一致，样品蛋白比实际的要大。配的试剂基本没有问题，我用的分离胶时16.5%。见图，从左到右第二个泳道本来只有5kDa，但是Marker这里是10多kDa，此带不是非特异带。注：我们用的Marker只有彩色能清楚看见，黑白不能清楚看见。

20130425 jian Cjieduan.jpg
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1楼 2013-04-29 10:40:47
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cole8608: 金币+1 2013-04-29 19:59:20
图太不清楚，难于帮助。
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2楼2013-04-29 10:57:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cole8608(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-29 15:34:01
cole8608: 金币+5 2013-04-29 19:59:07
胶跑得太难看了吧。我怀疑你的胶做得有问题。为什么要跑到分离胶一半停止电泳？此外，蛋白在胶上的表观分子量（参照marker估算的分子量）与实际蛋白分子量不符的情况很多。
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3楼2013-04-29 15:02:32
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cole8608

金虫 (小有名气)
这是Western blotting图片
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4楼2013-04-29 19:56:51
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cole8608

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-29 15:02:32
胶跑得太难看了吧。我怀疑你的胶做得有问题。为什么要跑到分离胶一半停止电泳？此外，蛋白在胶上的表观分子量（参照marker估算的分子量）与实际蛋白分子量不符的情况很多。

能告诉我你QQ吗，有些具体问题请教你，谢谢！
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5楼2013-04-29 19:58:53
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