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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白电泳相关问题求教
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zishilanxuan

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳相关问题求教

求教各位大神，我现在正在做蛋白电泳（SDS-PAGE），我现在遇到的问题是电泳能跑出带，但是整个带都往下移,Maker都跑下去了，感觉就是胶的上半部分根本没有带，不知道这是什么原因？是哪个试剂出现问题了？还是我设定的电压电流出现问题。我现在是前30分钟设定电压80V，电流60mA ,半小时后电压120V,电流60mA.请给位大侠指点一二。
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1楼 2013-03-19 21:07:22
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ganfucell

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑过了吧 时间缩短一点 不知道你跑了多长时间 一般浓缩胶连分离胶 100V 4.5h 即可
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理想爱情事业
2楼2013-03-19 21:50:23
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zysfjqz

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是跑过了，减小电压电流时间等都可以解决问题啊。而且还有指示剂可以判断是不是跑过了丫。。。
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3楼2013-03-19 22:12:48
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当下的距离

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是跑过了吧，减小电压电流时间等都可以解决问题啊。而且还有指示剂可以判断是不是跑过了丫。。。
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youcangetwhatyouwantifyouwantitenough.
4楼2013-03-20 00:59:25
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉你的胶的电流有些大，是一块胶吗。一般跑你说的电压的话，电流应该在15mA左右。此外，你确定胶的配方、丙烯酰胺溶液浓度、丙烯酰胺：甲叉丙烯酰胺的比例没有问题吗？
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5楼2013-03-20 03:39:32
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浩海涌涛

铜虫 (小有名气)
遇到了同样的问题，求教.
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我愿如风，随心而动
6楼2013-03-20 08:57:59
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emosgaogao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉楼主的电泳的电流偏大，我电泳的时候电流一般都不超过80v,30mA,很有可能是配胶的试剂出问题，楼主换试剂尝试尝试
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忍得住诱惑，耐得住寂寞
7楼2013-03-20 12:01:19
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lihongyue328

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-20 12:35:56
应该是时间和电压的问题，跑的时间过长样品和marker跑到了电泳缓冲液里面，我做的SDS-PAGE一般都是在浓缩胶时用80V电压，到分离胶时用120V电压，如果不着急的话都用80V电压跑出来的条带会更好看，开始做时可以自己掐时间看看，总结出要多产时间，一般跑到下面绿色的部分即可停止，不要跑到绿色下面了，否则就会出现您说的那种情况了，希望对您有帮助，祝实验顺利
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8楼2013-03-20 12:32:42
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linzshit

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个我以前经常遇到，试剂什么的基本都没有问题，它就是有一条离子带压着你的条带一直向下，使你的胶面上什么都剩不下，最终的解决途径是换一个小板跑，效果就好很多。我自己分析了下原因，配SDS-PAGE理论上需要在无氧的环境下进行，这样才能保证交联，如果玻璃板太大，其中包含的空气比较多，不利于凝胶。
以上是个人经验，希望能帮助到你
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9楼2013-03-20 12:36:55
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GreenPine615

铁虫 (初入文坛)
我也觉得跑过了。如果你用page ruler（一种marker）的话直接亲眼看marker的电泳状况，可以解决这个问题。
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10楼2013-03-22 14:04:47
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