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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 做电泳时蛋白条带出不来？
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pobiok

新虫 (初入文坛)

[求助] 做电泳时蛋白条带出不来？

请教一下，为什么做SDS-PAGE时蛋白的条带出不来，蛋白MARK也出不好?用的是10%的胶，试剂都是新配的.

IMG_20130109_双标.jpg
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1楼2013-01-10 12:05:07
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

qlw4567

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你这个侧面不是有条带出来么？有两条，只不过不太清楚。另外你的胶是不是做的不太均匀，线都是斜的。
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努力和媳妇一起上完博士
12楼2013-07-22 14:47:46
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★ ★ ★
pobiok: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-07-28 22:09:20
本帖仅楼主可见
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15楼2013-07-27 11:45:13
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lizhijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-01-11 07:59:24
marker跑的不好，可以肯定的原因之一是胶凝的不好。至于其他原因，与你配方和电泳条件有关！
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海上生明月，天涯共此时！
2楼2013-01-10 12:22:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
pobiok: 金币+1, ★有帮助 2013-01-10 14:17:53
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-01-11 07:59:38
marker跑得不行，觉得你的胶或者电泳条件有问题。再确定一下配方是否正确。胶的前沿不整齐，胶凝的速度是否过快或者过慢？实验室有其他人跑胶吗？效果怎么样？此外，不知道你的胶染了多久，至少脱色不完全。
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3楼2013-01-10 12:46:06
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pobiok

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-10 12:46:06
marker跑得不行，觉得你的胶或者电泳条件有问题。再确定一下配方是否正确。胶的前沿不整齐，胶凝的速度是否过快或者过慢？实验室有其他人跑胶吗？效果怎么样？此外，不知道你的胶染了多久，至少脱色不完全。

我用的配方跟别的实验室是一样的，别的实验室能跑出来。我跑的时候很奇怪，前面几个小时没问题，3-4小时后就分离胶就会有气泡，不知道为什么？
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4楼2013-01-10 14:17:26
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zx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-01-11 07:58:50
引用回帖:
4楼: Originally posted by pobiok at 2013-01-10 14:17:26
我用的配方跟别的实验室是一样的，别的实验室能跑出来。我跑的时候很奇怪，前面几个小时没问题，3-4小时后就分离胶就会有气泡，不知道为什么？...

这胶跑的时间也太长了吧？
胶重新配，仔细混匀，看看吧。
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5楼2013-01-10 14:33:55
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木星海

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 分析得很详细 2013-01-11 07:55:39
如果对于蛋白质凝胶电泳没有什么经验，头开始做遇上各种情况都是正常的。所以放松点，不要紧张或者很有压力。在不清楚状况的时候，重复实验是有必要的，说不定重新做胶，确保每一步骤都按照正确程序，该混匀的混匀，上样要连续稳定不要挤入气泡导致样品浮动，电压稳定，染色脱色都要控制。问题就解决了。

就像楼上几位说的，Marker跑的不好基本说明是胶的问题。但也有可能是上样时缺乏经验加的不好，我有个同学每次用移液枪做精细的东西手都会不自觉的抖动。

从你的图片上看，分离胶和浓缩胶中间怎么有条缝。我感觉像样品在从浓缩胶游到分离教时沿着胶线浮动到了其他地方。因为上面有一条颜色很深的条带
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我爱小木虫！
6楼2013-01-11 00:05:54
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
其实最好的帮助是来自于你的实验室，让有经验的同僚看你做遍实验就行了
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7楼2013-01-11 07:58:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by pobiok at 2013-01-10 14:17:26
我用的配方跟别的实验室是一样的，别的实验室能跑出来。我跑的时候很奇怪，前面几个小时没问题，3-4小时后就分离胶就会有气泡，不知道为什么？...

有气泡主要是电泳时产热，buffer里有SDS，有时候就会出现所谓的气泡。SDS-PAGE对温度没有严格的要求，有气泡产生也没什么大事。当然能够控制不产生很多热更好。你跑的是多大的胶，电压多少？此外，蛋白上样量是多少？
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8楼2013-01-11 08:42:31
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xiangzi1987

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
MARKER跑不出来就很可能是胶的问题了，图片上蛋白MARKER出来了，只是效果不好，应该是你的胶配方问题吧，也有可能是染色时间短了，还有看你的图片好像分离胶和浓缩胶没压好，边缘很不整齐，没关系多做就好了。
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9楼2013-01-11 09:27:43
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遥控器68

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
温度控制上应该有问题。楼主10%胶跑3-4h，太久了，不正常。按照用的仪器和胶大小浓度调整条件吧
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10楼2013-01-11 17:25:51
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