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pobiok

新虫 (初入文坛)

[求助] 做电泳时蛋白条带出不来?

请教一下,为什么做SDS-PAGE时蛋白的条带出不来,蛋白MARK也出不好?用的是10%的胶,试剂都是新配的.

IMG_20130109_双标.jpg
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qlw4567

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你这个侧面不是有条带出来么?有两条,只不过不太清楚。另外你的胶是不是做的不太均匀,线都是斜的。
努力和媳妇一起上完博士
12楼2013-07-22 14:47:46
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匿名

用户注销 (正式写手)

★ ★ ★ ★
pobiok: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-07-28 22:09:20
本帖仅楼主可见
15楼2013-07-27 11:45:13
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普通回帖

lizhijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-01-11 07:59:24
marker跑的不好,可以肯定的原因之一是胶凝的不好。至于其他原因,与你配方和电泳条件有关!
海上生明月,天涯共此时!
2楼2013-01-10 12:22:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
pobiok: 金币+1, 有帮助 2013-01-10 14:17:53
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-01-11 07:59:38
marker跑得不行,觉得你的胶或者电泳条件有问题。再确定一下配方是否正确。胶的前沿不整齐,胶凝的速度是否过快或者过慢?实验室有其他人跑胶吗?效果怎么样?此外,不知道你的胶染了多久,至少脱色不完全。
3楼2013-01-10 12:46:06
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pobiok

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-10 12:46:06
marker跑得不行,觉得你的胶或者电泳条件有问题。再确定一下配方是否正确。胶的前沿不整齐,胶凝的速度是否过快或者过慢?实验室有其他人跑胶吗?效果怎么样?此外,不知道你的胶染了多久,至少脱色不完全。

我用的配方跟别的实验室是一样的,别的实验室能跑出来。我跑的时候很奇怪,前面几个小时没问题,3-4小时后就分离胶就会有气泡,不知道为什么?
4楼2013-01-10 14:17:26
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zx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-01-11 07:58:50
引用回帖:
4楼: Originally posted by pobiok at 2013-01-10 14:17:26
我用的配方跟别的实验室是一样的,别的实验室能跑出来。我跑的时候很奇怪,前面几个小时没问题,3-4小时后就分离胶就会有气泡,不知道为什么?...

这胶跑的时间也太长了吧?
胶重新配,仔细混匀,看看吧。
5楼2013-01-10 14:33:55
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木星海

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 分析得很详细 2013-01-11 07:55:39
如果对于蛋白质凝胶电泳没有什么经验,头开始做遇上各种情况都是正常的。所以放松点,不要紧张或者很有压力。在不清楚状况的时候,重复实验是有必要的,说不定重新做胶,确保每一步骤都按照正确程序,该混匀的混匀,上样要连续稳定不要挤入气泡导致样品浮动,电压稳定,染色脱色都要控制。问题就解决了。

就像楼上几位说的,Marker跑的不好基本说明是胶的问题。但也有可能是上样时缺乏经验加的不好,我有个同学每次用移液枪做精细的东西手都会不自觉的抖动。

从你的图片上看,分离胶和浓缩胶中间怎么有条缝。我感觉像样品在从浓缩胶游到分离教时沿着胶线浮动到了其他地方。因为上面有一条颜色很深的条带
我爱小木虫!
6楼2013-01-11 00:05:54
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
其实最好的帮助是来自于你的实验室,让有经验的同僚看你做遍实验就行了
7楼2013-01-11 07:58:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by pobiok at 2013-01-10 14:17:26
我用的配方跟别的实验室是一样的,别的实验室能跑出来。我跑的时候很奇怪,前面几个小时没问题,3-4小时后就分离胶就会有气泡,不知道为什么?...

有气泡主要是电泳时产热,buffer里有SDS,有时候就会出现所谓的气泡。SDS-PAGE对温度没有严格的要求,有气泡产生也没什么大事。当然能够控制不产生很多热更好。你跑的是多大的胶,电压多少?此外,蛋白上样量是多少?
8楼2013-01-11 08:42:31
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xiangzi1987

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
MARKER跑不出来就很可能是胶的问题了,图片上蛋白MARKER出来了,只是效果不好,应该是你的胶配方问题吧,也有可能是染色时间短了,还有看你的图片好像分离胶和浓缩胶没压好,边缘很不整齐,没关系多做就好了。
9楼2013-01-11 09:27:43
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遥控器68

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
温度控制上应该有问题。楼主10%胶跑3-4h,太久了,不正常。按照用的仪器和胶大小浓度调整条件吧
10楼2013-01-11 17:25:51
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