应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
171/2返回列表12下一页
查看: 5439  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shiniyuanai

新虫 (小有名气)

[求助] 【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

最近我一直在跑蛋白质的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，已经试过很多次，还是跑不好。
    我的蛋白是pI为6.3~7.6的稻米蛋白，14kD~16kD，不止一种蛋白。参考王家政的蛋白技术手册，用的是10%的分离胶和5%的浓缩胶，电泳缓冲液的pH是8.8，冰浴电泳，但是跑出来的效果非常不好，条带如下，连浓缩胶里面都有条带，但是跑SDS-PAGE的时候是好的啊！！图片也贴在下面。

目标蛋白 SDS-PAGE.png



目标蛋白 Native-PAGE.png 脱色比较完全后在浓缩胶内能看到拖尾的条带。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

电泳、bio-rad 电转化仪及操作

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-09 13:21:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shiniyuanai

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-09 15:35:12
增溶的目的是利用detergent包被在蛋白分子的表面，使他们不发生聚合沉淀。你的浓缩胶里面的条带大概是聚合沉淀的蛋白。由于发生聚合，分子量变大，无法进入分离胶。...


终于找到一个出口。
但是我没用过detergent，Triton X-100能用于我的实验吗？？我查了一下，是否0.1%的Triton X-100这样的浓度比较适合溶解我的样品？？
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2012-10-09 15:55:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shiniyuanai: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢，真是好人 2012-10-09 15:19:07
非变性电泳条件下，蛋白依靠的是本身的负电荷移动，比起普通的SDS-PAGE，跑起来要慢得多。而且如果样品浓度过高会引起聚合沉淀。从你的胶看来可能就是这种情况。你可以用一些较弱的非离子去垢剂（例如Triton X-100）增溶一下样品。不知道你跑非变性胶的目的，是做in gel活性染色还是只想要分开不同的蛋白呢？
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

zh910917
3楼2012-10-09 14:53:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baoshiling

银虫 (小有名气)
有时蛋白本身的性质决定了在native胶中有多种形式看起来会smear，但当找到了其配体或者互作的蛋白等一起电泳时就会出现非常漂亮的一条带。
赞一下(1人) 回复此楼
相信自己，怒放生命
16楼2014-10-09 08:21:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

卡门旺角

金虫 (小有名气)
不懂帮顶!!
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

shiniyuanai
2楼2012-10-09 14:06:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shiniyuanai

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-09 14:53:18
非变性电泳条件下，蛋白依靠的是本身的负电荷移动，比起普通的SDS-PAGE，跑起来要慢得多。而且如果样品浓度过高会引起聚合沉淀。从你的胶看来可能就是这种情况。你可以用一些较弱的非离子去垢剂（例如Triton X-100） ...

我有几点想说明一下。
1. 增溶的目的是什么呢？？稀释样品？？我的样品溶解性还是非常好的。
2. 我的目的是分开不同的蛋白，在SDS-PAGE中，由于分子量大小相近，分不开了。
3. 浓缩胶里也有条带是为什么呢？？
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-09 15:25:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shiniyuanai at 2012-10-09 15:25:05
我有几点想说明一下。
1. 增溶的目的是什么呢？？稀释样品？？我的样品溶解性还是非常好的。
2. 我的目的是分开不同的蛋白，在SDS-PAGE中，由于分子量大小相近，分不开了。
3. 浓缩胶里也有条带是为什么呢？？...

增溶的目的是利用detergent包被在蛋白分子的表面，使他们不发生聚合沉淀。你的浓缩胶里面的条带大概是聚合沉淀的蛋白。由于发生聚合，分子量变大，无法进入分离胶。
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-09 15:35:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eulota

金虫 (著名写手)
我们做植物蛋白电泳的样品中一般TritonX100的浓度是1%
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

shiniyuanai
7楼2012-10-09 19:48:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shiniyuanai

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by eulota at 2012-10-09 19:48:26
我们做植物蛋白电泳的样品中一般TritonX100的浓度是1%

那我能问一下，你们实验电泳时，是如何加Triton X-100的啊？？是在溶解蛋白的时候用Triton X-100溶解，还是电泳制样时加入？？
赞一下 回复此楼
8楼2012-10-09 20:53:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shiniyuanai

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡门旺角 at 2012-10-09 14:06:57
不懂帮顶!!

非常感谢你最真诚的支持！！！
赞一下 回复此楼
9楼2012-10-09 21:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by shiniyuanai at 2012-10-09 15:55:33

终于找到一个出口。
但是我没用过detergent，Triton X-100能用于我的实验吗？？我查了一下，是否0.1%的Triton X-100这样的浓度比较适合溶解我的样品？？...

浓度要靠自己试，因为不同的样品所需的浓度不一样，可以从0.1-2%做个梯度。
赞一下 回复此楼
10楼2012-10-10 07:59:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shiniyuanai 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[教师之家] 焦虑 +5 水冰月月野兔 2026-03-13 7/350 2026-03-14 15:14 by 农药害害
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 一志愿天大化工（085600）调剂总分338 +6 蔡大美女 2026-03-09 6/300 2026-03-14 02:46 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-09 6/300 2026-03-14 02:14 by JourneyLucky
[考研] 一志愿安徽大学材料工程专硕313分，求调剂的学校 +8 Yu先生 2026-03-10 10/500 2026-03-14 01:04 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +5 邱gl 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:37 by JourneyLucky
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:06 by 星空星月
[考研] 332求调剂 +3 Zz版 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:36 by 18595523086
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 【0856】化学工程（085602）313 分，本科学科评估A类院校化学工程与工艺，诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:06 by ruiyingmiao
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[基金申请] 提交后的基金本子，已让学校撤回了，可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
[考博] 26申博求助 +3 跳跃饼干 2026-03-10 4/200 2026-03-10 21:15 by Tntcnn
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
[考研] 327分求调剂086 +4 西红柿?小帅 2026-03-09 7/350 2026-03-10 14:47 by ruiyingmiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭